张慧晔，魏孝义，黄琳

（1.广州白云山和记黄埔中药有限公司，广东 广州 510515；2.中国科学院华南植物园，广东 广州 510615）

口炎清颗粒是广州白云山和记黄埔中药有限公司独家生产的中药保护品种，由山银花、天冬、麦冬、玄参、甘草5味中药组成，具有滋阴清热，解毒消肿的功能。用于阴虚火旺所致的口腔炎症[1]。本文报道从口炎清流膏中分离得到4个有机酸成分：咖啡酸（1）、绿原酸（2）、3，5-二咖啡酰奎宁酸（3）和3，4-二咖啡酰奎宁酸（4），为君药山银花的主要成分。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200色谱仪，日本SHIMADZU公司LC-6AD／RID-10A，色谱柱为YMC-Pack ODS（250 mm×4.6 mm，250 mm×20 mm）。柱色谱用硅胶（100～200目，青岛海洋化工有限公司）；柱色谱反相硅胶[十八烷基硅醚，Develosil ODS，50μm，日本野村（Nomura）化学株式会社]；大孔吸附树脂（Diaion HP-20，日本三菱化学株式会社）；薄层色谱板（烟台江友硅胶开发有限公司）；反相（RP-18）TLC板[德国默克（Merck）公司]。核磁共振波谱用Bruker DRX-400核磁共振仪测定，以TMS为内标。电喷雾质谱（ESIMS）用 MDS SCIEX API 2000 LC／MS／MS仪，以甲醇为溶剂，直接进样测定。

1.2 试药

甲醇、丙酮、三氯甲烷和石油醚（60～90℃）：均为分析纯，广州化学试剂二厂；乙酸乙酯、正丁醇（天津市大茂化学试剂厂）为分析纯；乙腈为色谱纯（美国天地公司，批号811900），水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。

口炎清流膏（广州白云山和记黄埔中药有限公司提供）。

2 提取和分离

取口炎清流膏12 g，加入甲醇500 mL，超声处理（功率360 W，频率35 kHz）30 min，放冷，摇匀，滤过，滤液减压回收溶剂，得8 g干膏；经大孔吸附树脂柱（120 g），6 L的蒸馏水淋洗，淋洗液弃去，再用甲醇6 L洗脱，收集洗脱液，减压浓缩后得甲醇洗脱物；甲醇洗脱物（2.4 g）经反相硅胶柱色谱（C18，50μm，25 g），得到10%甲醇水溶液洗脱部分360 mg、20%甲醇水溶液洗脱部分65 mg、30%甲醇水溶液洗脱部分95 mg、40%甲醇水溶液洗脱部分197 mg和50%甲醇水溶液洗脱部分30 mg。10%甲醇水溶液洗脱部分经 HPLC分析 [乙腈-0.4%磷酸水溶液（13∶87），检测波长 327nm][1]，与绿原酸对照品对照显示10%甲醇水溶液洗脱部分的主要成分为绿原酸，含量为31%；20%甲醇水溶液洗脱部分，将其与咖啡酸对照品同时经3种薄层系统展开、显色[2]，3种展开系统下均显示20%甲醇水溶液洗脱部分中的主要成分与咖啡酸对照品的Rf值一致，再经HPLC分析 [0.1%甲酸水溶液-乙腈（90∶10）]，与咖啡酸对照品对照，显示20%甲醇洗脱部分的主要成分为咖啡酸，含量为13%；40%甲醇水溶液洗脱部分经HPLC制备，乙腈-0.1%甲酸水溶液（20∶80）洗脱，得到化合物3（10 mg）和化合物4（10 mg）。

3 结构鉴定

3.1 化合物3

黄色固体；分子式为C25H24O12；负离子ESIMSm／z515[M-H]-，353[M-C9H6O3-H]-，191[M-2C9H6O3-H]-，179，135；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ7.61（1H，d，J＝16.2Hz，H-7，caffeoyl），7.57（1H，d，J＝15.6Hz，H-7′，caffeoyl），7.06（2H， s， H-2， H-2′， caffeoyl），6.96（2H，dd，J＝8.0 Hz，1.8 Hz，H-6，H-6′，caffeoyl），6.77（2H，d，J＝7.8 Hz，H-5，H-5′，caffeoyl），6.35（1H， d，J＝ 15.6 Hz， H-8，caffeoyl），6.26（1H， d，J＝ 15.6 Hz， H-8′，caffeoyl），5.43（1H，m，H-3，quinic），5.40（1H，m，H-5，quinic），3.97（1H，dd，J＝7.8 Hz，3.0 Hz，H-4，quinic），2.31～2.16（4H，H-2×2，H-6×2，quinic）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）：δ177.6， 168.9， 168.4， 149.69， 149.5， 147.3，147.1，146.8 ×2，128.0，127.8，123.1，123.0，116.5×2，115.6，115.3，115.1×2，74.8，37.7，72.1，70.7，72.6，36.1。数据与文献报道的3，5-二咖啡酰奎宁酸（3，5-dicaffeoylquinic acid）一致[3-4]。

3.2 化合物4

黄色固体；分子式为C25H24O12；负离子ESIMSm／z515[M-H]-，353[M-C9H6O3-H]-，191[M-2C9H6O3-H]-，179，135；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）：δ 7.47（1H，d，J＝16.0Hz，H-7，caffeoyl），7.41（1H，d，J＝16.0Hz，H-7′， caffeoyl）， 7.01 （2H， s， H-2， H-2′，caffeoyl），6.96（2H，d，J＝7.6 Hz，H-6，H-6′，caffeoyl）， 6.78（1H， d，J＝ 8.0 Hz， H-5，caffeoyl）， 6.73（1H， d，J＝ 8.0 Hz， H-5′，caffeoyl），6.24（1H， d，J＝ 16.0 Hz， H-8，caffeoyl），6.13（1H， d，J＝ 16.0 Hz， H-8′，caffeoyl），5.34（1H，m，H-3，quinic），4.94（1H，d，J＝5.6 Hz，H-4，quinic），4.16（1H，m，H-5，quinic），2.14（2H，J＝12.8 Hz，H-2×2，quinic），2.01（1H，m，H-6，quinic），1.87（1H，m，H-6，quinic）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）：δ177.7，168.6，168.3，149.6×2，147.7，147.5，146.7×2，127.7，127.6，123.1×2，116.5×2，115.2×2， 114.8， 114.7， 76.1， 75.8， 69.7， 69.1，39.7，38.5。数据与文献报道的3，4-二咖啡酰奎宁酸（3，4-dicaffeoylquinic acid）一致[3-4]。

4 结果和讨论

在对中药现代化的研究中，张礼和[5]认为直接对中药复方进行拆方研究，通过对各药材的化学基础研究来筛选活性化合物，有学者[6-7]认为药物同煎后，其成分不是简单的加和，而是发生了一定的化学变化，所以表现出药效的变化，黄成刚[8]则认为复方的多种功效主要是多成分、多系统、多靶点相互作用的结果。本实验通过对口炎清复方的分离，得到4个酚酸类成分：绿原酸、咖啡酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸和3，5-二咖啡酰奎宁酸；根据已有文献报道，这4种酚酸类成分是山银花抗菌消炎的主要活性成分[9-12]，从而证明口炎清的抗菌消炎作用与君药山银花直接相关，并为口炎清复方的质量标准研究工作提供了依据。