李 静 周长勇 尹 磊 岳 旺 张继国 刘占涛

(1.青岛大学医学院药理学教研室，山东 青岛 266021； 2. 泰山医学院药理学教研室，山东 泰安 271016)

心肌微血管内皮细胞(rCMEC)的病理变化是动脉粥样硬化发生发展的重要过程，氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是引起心肌微血管内皮细胞损伤的重要因子[1]，国内的几大细胞库中还没有心肌微血管内皮细胞株，国外虽有人的心肌微血管内皮细胞株，但价格昂贵且培养条件要求高。本实验进行了心肌微血管内皮细胞原代培养并建立了ox-LDL损伤模型。吲哚-2，3-二酮化学结构明确，有多种生物活性，有研究表明它有抗炎和抗动脉粥样硬化的作用[2-3]，本实验在细胞水平上初步观察了它对ox-LDL所致心肌微血管内皮细胞损伤的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

出生10天左右的健康清洁级SD大鼠，购自青岛市药检所实验动物中心。

1.2 主要仪器与器材

CO2培养箱(Heraeus,型号：BB5060UV)，倒置显微镜(Olympus，型号：CKX41)，超净工作台(博迅，型号：SW-CJ-40)，离心机(飞鸽，型号：TDL-80-2C)，光学显微镜(Motic B Series)，550型酶联免疫检测仪(日本，BIO-RAD)。

1.3 主要试剂

吲哚-2，3-二酮(由青岛大学药物研发基地提供)，DMEM高糖培养基(HyClone,批号：NWM0542)，胎牛血清(天津灏洋，批号：20101019)，胰蛋白酶-EDTA(天津灏洋，批号：TE2004Y)，青霉素-链酶素溶液(天津灏洋，批号：PS2004HY)，Triton X-100(索莱宝，批号：T8200)，兔抗大鼠CD31多克隆抗体(武汉博士德，批号：27648)，SABC免疫组化试剂盒(武汉博士德，批号：07G28CJ)，DAB试剂盒(武汉博士德，批号：07G23C22)，苏木素染色液(索莱宝，批号：20120703)，中性树胶(国药集团化学试剂有限公司，批号：20111108)，ox-LDL(北京协生生物，丙二醛MDA含量为32 nmol·ml-1)，MTT(Sigma，批号：M2128)，DMSO(索莱宝，批号：D8371)，其他试剂均为国产分析纯。……