陈将飞，陈元红，靳大庆

（1.浙江省模式生物技术与应用重点实验室，温州医学院水域科学与环境生态研究所，浙江 温州325035；2.国家遗传工程实验室，复旦大学生命科学院 上海 200433）

一种斑马鱼肝脏特异表达转基因载体的制备方法

陈将飞1，陈元红1，靳大庆2

（1.浙江省模式生物技术与应用重点实验室，温州医学院水域科学与环境生态研究所，浙江 温州325035；2.国家遗传工程实验室，复旦大学生命科学院 上海 200433）

目的：建立一套快速制备斑马鱼肝脏特异表达转基因载体的新方法。方法：首先利用multi-site gateway技术将斑马鱼肝脏脂肪酸结合蛋白（fabp10a）启动子片段与入门载体进行BP重组获得启动子的入门克隆pENTR-fabp10a，然后将目的基因克隆到载体pME-MCS中形成入门克隆pENTR-interest，最后通过multi-site gateway技术将pENTR-fabp10a、pENTR-interest和含有EGFP标记基因的p3E-IRES-EGFPpA质粒在Tol2转座载体pDestTol2pA2上进行定向重组即可获得斑马鱼肝脏特异性表达转基因载体pTol2-fabp10a-interest-IRES-EGFP。本研究采用红色荧光蛋白基因DsRed2作为目的基因，用上述方法构建了转基因载体pTol2-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP，并将其注射至单细胞期斑马鱼胚胎中进行表达分析。结果：转基因载体pTol2-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP在斑马鱼肝脏组织中能实现红色和绿色荧光蛋白同步特异表达。结论：利用Tol2转座系统以及multi-site gateway技术构建斑马鱼肝脏特异性表达转基因载体是一套行之有效的方法。

Tol2转座子；斑马鱼；multi-site gateway技术；肝脏特异性表达

转基因载体的构建是开展基因功能和转基因动物模型构建研究的基础。传统转基因载体的构建方法主要是通过分子克隆手段将组织特异性启动子、目的基因连入到真核表达载体中来实现的，为了便于观察目的基因的表达，往往还会在目的基因的末端融合表达报告基因。……