王元元，黄云英，杜 娟，沈 丽，张德芹，王雪妮

蜂蜜、蜂胶对深Ⅱ度烫伤大鼠创面愈合的影响*

王元元，黄云英，杜 娟，沈 丽，张德芹，王雪妮

[目的]研究蜂蜜、蜂胶外用对深Ⅱ度烫伤模型大鼠创面愈合的影响。[方法]采用YLS-5Q台式超级控温烫伤仪制备大鼠深Ⅱ度烫伤模型。观察蜂蜜、蜂胶外用对烫伤创面愈合的影响，观察创面皮肤组织学变化，检测大鼠血清中羟脯氨酸（HYP）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量。[结果]蜂蜜、蜂胶外用能显著提高烫伤大鼠创面愈合率（P<0.01）；能显著提高大鼠血清中SOD、HYP含量（P<0.01或P<0.05）。[结论]蜂蜜、蜂胶外用具有明显的促进烫伤创面愈合的作用。

蜂蜜；蜂胶；外用；烫伤；创面愈合

蜂蜜为蜜蜂科昆虫中华蜜蜂或意大利蜂所酿的蜜。春至秋季采收。蜂蜜味甘，性平，归肺、脾、大肠经。蜂胶为蜜蜂科昆虫意大利蜂（Apis mellifera Linnaeus.）的干燥分泌物。多于夏季从蜂箱中收集，除去杂质。蜂胶味苦、辛，性寒，归脾、胃经。蜂蜜、蜂胶均为既可内服、又可外用的常用中药。历版《中华人民共和国药典》（简称《中国药典》）对蜂蜜内服功能及主治均有详细的记载，但多缺少其在外用功能及主治方面的记载。蜂胶功能主治的国家标准首次收载于2005年版《中国药典》，但未明确指出蜂胶的外用功能主治标准。2010年版《中国药典》对蜂蜜“外用生肌敛疮”、“外治疮疡不敛，水火烫伤”和蜂胶“外用解毒消肿，收敛生肌”、“外治皮肤皲裂，烧烫伤”的记载，填补了蜂蜜、蜂胶长期以来外用功能的阙如[1]。

蜂蜜、蜂胶临床运用具有良好促皮肤烫伤愈合的作用，但对其药理作用研究国内外尚少见系统报道，其作用靶点及机制有待于进一步研究。为进一步阐明其促愈机制，本实验采用大鼠深Ⅱ度烫伤模型观察蜂蜜、蜂胶外用对皮肤烫伤创面愈合的影响，为《中国药典》完善蜂蜜、蜂胶外用“解毒消肿、生肌敛疮”功效提供药效学参考依据。

1 实验材料

1.1 药物 蜂蜜药材购于安徽新兴中药材饮片有限公司（批号：20100127），由天津中医药大学生药教研室李天祥老师鉴定。蜂胶药材购于安徽新兴中药材饮片有限公司（批号：20100127），由天津中医药大学生药教研室李天祥老师鉴定。由于蜂胶很难溶于水，所以研究多采用蜂胶乳化剂进行实验研究，本实验给药前用吐温80将蜂胶配制成70 g/kg的药液。京万红软膏为达仁堂药业有限公司产品（批号：211738）。

1.2 动物 健康Wistar大鼠80只，雄性，体质量（200±10）g。由天津市山川红实验动物科技有限公司提供。饲养于18～22℃清洁级动物实验室内，动物许可证号为SCXK（津）2009-0001。

1.3 试剂 吐温80[天津市北方天医化学试剂厂（批号：20080902）]；水合氯醛[成都市科龙化工试剂厂（批号：20100125）]；羟脯氨酸（HYP）测定试剂盒[美国R&D公司产品,天津博奥信德科技有限公司提供（分装批号：201010）]；超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒[美国R&D公司产品,天津博奥信德科技有限公司提供（分装批号：201010）]。

1.4 仪器 TD-10001电子天平（天津市天马仪器厂）；YLS-5Q台式超级控温烫伤仪（济南益延科技发展有限公司）；Infinite M200微量多功能读板机（瑞士TECAN公司）；BMJ-1生物组织包埋机（天津航空机电公司）；RM2135切片机（德国Leica公司；WH-71电子恒温干燥箱，天津泰斯特仪器有限公司）；BX41研究级正置显微镜及成像系统（日本Olympus公司）。

2 方法

2.1 模型制备 Wistar大鼠80只，雄性，按随机数字表法随机分为8组，每组10只。分别为模型对照组，京万红烫伤膏组，蜂蜜高、中、低剂量治疗组和蜂胶高、中、低剂量治疗组。造模前剃除大鼠背毛，面积约为25 cm2。造模当天以3.5%水合氯醛（10 mL/kg）腹腔注射麻醉，在大鼠背部脱毛处用YLS-5Q台式超级控温烫伤仪进行烫伤，设置烫伤温度为90℃，时间为15秒，压力为1 000 g。所有大鼠均采取同样的烫伤条件，制作深Ⅱ度烫伤模型[2]。

2.2 给药 造模后第2天除模型对照组外，京万红烫伤膏组外涂京万红烫伤膏1 g/只，蜂蜜高、中、低剂量组外涂蜂蜜生药10.8、5.4、2.7 g/kg；蜂胶高、中、低剂量组外涂蜂胶生药0.20、0.10、0.05 g/kg。每日给药1次，连续给药21 d。给药治疗期间大鼠分笼饲养，每日均饲以普通饲料，自由进食、饮水。

2.3 检测指标 每组于给药第3、7、14、21 d拍照，所拍照片用photoshop软件处理，计算创面愈合率[3]，计算公式为：创面愈合率=（原始创面面积-未愈合创面面积）/原始创面面积×100%。给药21 d后，大鼠麻醉，腹主动脉取血，离心（3 000 r/min，20 min），分离血清，用酶联免疫法测定大鼠血清中HYP、SOD的含量；取大鼠背部创面皮肤，用10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，切片，苏木-伊红（HE）染色，光镜下观察标本组织学的变化。

2.4 统计学方法 采用SPSS18.5统计软件进行处理。计量资料以均数±标准差（±s）表示，正态分布的计量资料组间比较采用单因素方差分析，偏态分布的计量资料组间比较采用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 对创面愈合率的影响 与模型对照组相比，给药第7天后，蜂蜜中、低剂量组和蜂胶高剂量组大鼠创面愈合率明显提高，差异有统计学意义（P<0.01）。给药第14天后，蜂蜜低剂量组大鼠创面愈合率明显提高，差异有统计学意义（P<0.01）。给药第21天后，京万红烫伤膏组、蜂蜜高、中、低剂量组和蜂胶低剂量组大鼠创面愈合率明显提高，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。见表1。

表1 蜂蜜、蜂胶对深Ⅱ度烫伤大鼠创面愈合率的影响（±s，n=8）

表1 蜂蜜、蜂胶对深Ⅱ度烫伤大鼠创面愈合率的影响（±s，n=8）

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

创面愈合率（%）3 d 7 d 14 d 21 d模型对照组 - 3.53±4.38 03.17±4.84 23.46± 8.73 68.59±10.57京万红烫伤膏组 1 g/只 0.57±0.92 01.55±4.88 18.64± 8.14 78.72± 9.56*蜂蜜高剂量组 10.80 2.87±4.22 08.48±6.11 27.09±13.32 82.69± 7.65**蜂蜜中剂量组 5.40 1.02±1.69 11.34±6.50**33.67±14.47 82.53±11.78**蜂蜜低剂量组 2.70 1.11±1.44 13.42±5.82**40.59±19.42**88.56± 8.12**蜂胶高剂量组 0.20 0.75±2.34 11.65±6.82**22.89±12.25 74.09±11.50蜂胶中剂量组 0.10 0.07±0.22 05.14±5.02 13.96± 6.99 73.99± 9.63蜂胶低剂量组 0.05 0.48±1.45 07.27±7.29 23.33±14.06 81.77±11.08*组别 剂量（g/kg）

3.2 对血清中HYP、SOD含量的影响 与模型对照组相比，蜂蜜中、低剂量组和蜂胶高、中、低剂量组HYP含量明显升高，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；蜂蜜低剂量组和蜂胶中、低剂量组SOD含量明显升高，差异有统计学意义（P<0.01），见表2。

表2 蜂蜜、蜂胶对深Ⅱ度烫伤大鼠血清中HYP、SOD 含量的影响（±s，n=8）

表2 蜂蜜、蜂胶对深Ⅱ度烫伤大鼠血清中HYP、SOD 含量的影响（±s，n=8）

注：与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。

组别 剂量（g/kg） HYP（μg/L） SOD（U/L）模型对照组 - 2.59±0.33 121.34±18.07京万红烫伤膏组 1 g/只 2.64±0.31 126.83±21.74蜂蜜高剂量组 10.80 2.77±0.30 129.70± 7.76蜂蜜中剂量组 5.40 3.06±0.35* 122.54±20.11蜂蜜低剂量组 2.70 3.14±0.46** 161.19±19.16**蜂胶高剂量组 0.20 3.21±0.52** 135.95±10.38蜂胶中剂量组 0.10 3.20±0.42** 156.82±25.59**蜂胶低剂量组 0.05 3.21±0.17** 175.50±25.37**

3.3 对创面组织学变化的影响 镜检可见,模型对照组皮肤表皮坏死，真皮胶原纤维束排列紊乱且有断裂现象，腺体消失，内有大量炎症细胞浸润，偶见毛细血管。各给药组与模型对照组比较可见，表皮和真皮结构均有明显改善，表皮损伤得到修复，胶原纤维束排列整齐，真皮毛囊增多，腺体分布渐趋正常，炎症细胞对皮肤的浸润程度减弱，血管较明显。

4 讨论

在创伤愈合过程中，胶原蛋白的合成和分泌是伤口愈合的决定性因素。而HYP在胶原蛋白中含量最多，是胶原蛋白特有的氨基酸之一，是人体皮肤形成的关键物质。SOD广泛存在于需氧代谢的细胞中，其活力与皮肤形成有密切关系。SOD能特异性清除超氧阴离子，保护组织免受氧自由基的损害[4]。

本实验通过采用对深Ⅱ度烫伤模型大鼠外涂蜂蜜、蜂胶的方法，观察其外用对大鼠烫伤创面愈合作用的影响。通过检测大鼠血清中HYP、SOD的含量，发现蜂蜜、蜂胶可通过增加烫伤大鼠血清中HYP的含量促进血清中胶原的合成，从而加速烫伤创面的愈合；通过增加烫伤大鼠血清中SOD的含量增强机体对自由基的清除能力，从而避免自由基对机体组织细胞的损伤。

随着国内外对蜂蜜、蜂胶研究的不断深入，其外用价值也将会越来越受到重视。目前蜂蜜、蜂胶作为外用解毒消肿、收敛生肌良药已广泛应用于临床各科疾病。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2010：337.

[2] 王雪妮,张德芹,黄云英,等.大鼠烫伤模型制备的实验研究[J].天津中医药大学学报，2011，30（4）：218-219．

[3]黄国钧,黄勤挽.医药实验动物模型——制作与应用[M].北京:化学工业出版社,2010:722-723.

[4] Wlaschek M,Scharffetter-Kochanek K.Oxidative stress in chronic venou leg gulcers[J].Wound Repair Regen,2005,13(5):452-461.

Effects of honey and propolis on wound healing in rats with second-degree scald

WANG Yuan-yuan,HUANG Yun-ying,DU Juan,SHEN Li,ZHANG De-qin,WANG Xue-ni
（The TCM Research Institute,Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China）

[Objective]To investigate the effects of honey and propolis on wound healing in rats with seconddegree scald.[Methods]Second-degree scald on the back of rat was induced by scald-reproducing instrument with super-temperature control(YLS-5Q).The rates of wound healing and histological changes were observed.The level of hydroxyproline(HYP)and superoxide dismutase(SOD)in serum were determined by ELISA.[Results]The rates of wound healing in treatment group were increased compared with the control group(P<0.01).The levels of HYP and SOD in treatment group were higher than that in the control group (P<0.01 or P<0.05).[Conclusion]Honey and propolis has a promoting effect on burn wound healing by its external application.

honey;propolis;external application;scald;wound healing

R285.5

A

1673－9043（2012）03－0154-03

国家科技支撑计划基金项目（2008BA153B09）。

300193 天津中医药大学中医药研究院

王元元（1986-），女，硕士研究生，主要研究方向为中药基本理论及临床应用。

*通讯作者：张德芹。

2012-06-24）

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