金雪花，吕淑霞，张超，徐彬，于晓丹

(沈阳农业大学生物科学技术学院，辽宁沈阳110866)

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus，VP)是一种常见肠道致病菌，其污染会给海水养殖业带来严重损失，还会引起人类腹泻等肠道疾病及食物中毒，出现腹泻、腹部痉挛、恶心、呕吐和头痛等症状［1］。自2001年以来，副溶血弧菌性食物中毒爆发已经成为中国最常见的食源性疾患。随着人们对食品安全性要求的不断提高，对细菌的“活的非可培养状态”(Viable but non-culturable state，VBNC)进行检测研究的实际意义越来越明显。常规的基于分子水平检测病原菌的方法以其具有快捷、灵敏、特异性强等优点已用于副溶血性弧菌及其他致病菌的检测研究［2］，但是其缺点在于不能区分所检测到的病原菌是活细胞还是死细胞，而且由于需要精密度高的仪器而限制了其在现场和基层单位的应用［3］。近年来环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)以其高效、灵敏、操作方便等优点，使其在食源性致病菌以及病毒的检测中得到了重要的应用［4-6］。LAMP检测法无需精密度高的仪器，仅需在恒温条件下便可完成核酸扩增反应［7］，是一种可实现现场和基层单位应用的方法。Thidium Bromide Monoazide(EMA)作为一种DNA结合染料，易光解形成氮宾化合物且能渗透到细胞壁(膜)不完整的菌体内，与DNA分子不可逆的共价结合，从而抑制死细胞的DNA扩增。因此，EMA与PCR、LAMP结合检测鉴定副溶血性弧菌的死/活细胞具有一定的可行性。目前，已有EMA与PCR、LAMP相结合，成功抑制死细胞的扩增且对混合菌中活细胞进行定量检测的报道［8-10］。……