宋佳蕾，绳秀珍，战文斌

（中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室，山东青岛266003）

免疫细胞化学法测定鱼类淋巴囊肿病毒（LCDV）滴度＊

宋佳蕾，绳秀珍＊＊，战文斌

（中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室，山东青岛266003）

利用免疫细胞化学法测定鱼类淋巴囊肿病毒（LCDV）滴度。以牙鲆鳃细胞系（FG）作为感染细胞，将生长旺盛的FG细胞接种于48孔培养板中培养至形成细胞单层，用2倍连续稀释的LCDV粗提液分别接种FG细胞。固定各稀释度LCDV感染后的FG细胞，孵育抗牙鲆LCDV单克隆抗体，其后再运用生物素－亲合素反应系统，以碱性磷酸酶底物APRed试剂盒发色。倒置显微镜观察，被病毒感染的FG细胞的细胞质呈现红色，未被感染细胞的细胞质呈无色。记录各稀释度病毒感染的阳性细胞孔数，按Reed－Muench法计算组织细胞培养半数感染量（TCID50）。结果显示，免疫细胞化学法测得LCDV在FG的滴度为1.77×210TCID50／mL。该法可以用来有效测定LCDV滴度，且结果直观、准确性较好，灵敏度较高。

淋巴囊肿病毒；牙鲆鳃细胞；组织细胞培养半数感染量；免疫细胞化学法

鱼类淋巴囊肿病（Lymphocystis disease，LCD）是1种典型的皮肤和浅表组织慢性病毒性疾病，呈世界性分布，可感染已知至少140种海水、半咸水和淡水鱼类，是对鱼类危害较为严重的病毒病之一，感染率可高达80%，死亡率可达30%，给水产养殖业造成重大经济损失［1］。其病原为淋巴囊肿病毒（Lymphocystis disease virus，LCDV），隶属虹彩病毒科（Iridoviridae），淋巴囊肿病毒属（Lymphocystivirus）［2］。研究发现LCDV可在蓝鳃鱼幼鱼细胞系BF－2、日本牙鲆胚胎细胞系HINAE、草鱼肾细胞系GCK、牙鲆鳃细胞系FG等细胞内增殖并引起细胞病变（CPE）［3－6］。……