4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物抑制HSV-2感染研究
2012-01-06陈钰宋思维邱敏吴稚伟
陈钰,宋思维,邱敏,吴稚伟
(南京大学医学院公共健康医学中心,江苏南京 210093)
人类单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)是生殖器疱疹的病原体,其感染人体后易潜伏在骶神经根区,在一定条件下受到激活后,临床主要表现为生殖器周围出现疼痛性疱疹,反复发作,难以治愈,为感染率最高的性传播疾病之一。目前研究表明,HSV-2和HIV-1感染具有协同作用,HSV-2感染引起的开放性损伤和生殖道局部炎症可使感染HIV-1的危险性增加,预防和治疗HSV-2的感染非常重要。目前市售治疗HSV-2感染的药物共50多种,主要为核苷类化合物,主要作用于阻断病毒建立感染后的复制过程。而预防性药物未见于市面,故开发新的阻断病毒侵入预防性药物变得尤为重要。本研究探索4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物(PSM)[1-2]这一常用阻垢剂的共聚化合物对HSV-2病毒感染细胞和小鼠的作用,评估其在体内和体外的抗病毒效果。
1 材料与方法
1. 1 材料
1.1.1 细胞和病毒 Vero(非洲绿猴肾细胞)、293T、HEC-1-A(人子宫内膜癌细胞)均购自ATCC。HSV-2(G)(实验室适应株)由南京大学李尔广教授馈赠。
1.1.2 动物与分组 BALB/c小鼠,雌性,共40只,体重(15±2)g,购自扬州大学比较医学中心。随机将小鼠平均编入实验组和对照组。
1.1.3 主要试剂 PSM购自Sigma公司;Lipofectamine 2000转染试剂购自Invitrogen公司;pGL4质粒、Luciferase检测试剂盒购自Promega公司;HSV-1/2 gD蛋白抗体及β-catenin蛋白抗体购自 Santa Cruz公司;Depo-Provera购自Pfizer公司;荧光二抗购自Odyssey公司。
1. 2 方法
1.2.1 病毒的增殖和滴定 在293T细胞中接种约107pfu HSV-2(G),48 h后转移1 ml上清到另一皿293T细胞中,重复3~5次后获得毒力较高的HSV-2(G)。接种5×104个·孔-1Vero细胞至96孔细胞培养板进行培……