马玉珍, 任 宇, 周雪原 , 刘东军, 旭日干

(1. 内蒙古自治区人民医院, 呼和浩特 010017; 2. 内蒙古大学 哺乳动物繁殖生物学与生物技术教育部重点实验室, 呼和浩特 010017)

体细胞核移植生产绵羊转hALR基因囊胚

马玉珍1,2,*, 任 宇2, 周雪原2, 刘东军2, 旭日干2

(1.内蒙古自治区人民医院,呼和浩特010017; 2.内蒙古大学 哺乳动物繁殖生物学与生物技术教育部重点实验室,呼和浩特010017)

扩增人肝细胞再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,ALR)基因, 利用质粒pIRES2-EGFP构建新霉素(Neo)、增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein, EGFP)双标记基因且EGFP和ALR基因为双顺反子的真核表达载体。LipofectAMINETM介导其转染体外培养的绵羊胎儿成纤维细胞(sheep fetal fibroblast cells, sFFCs); 经G418筛选转基因细胞; 激光共聚焦显微镜挑选绿色荧光单克隆细胞。PCR、RT-PCR和免疫组织化学方法进一步检测ALR基因及其表达; 稳定表达外源基因的sFFCs作供体, 移入去核的绵羊卵母细胞中, 进行体细胞核移植。通过激光共聚焦显微镜和ALR抗体检测EGFP、ALR基因在胚胎水平上的表达，其结果表明：由IRES连接的EGFP和ALR基因可在绵羊胎儿成纤维细胞内同时表达，由此细胞核移植产生的转基因胚胎在发育的各阶段均可见绿色荧光; 囊胚中所有细胞表达EGFP基因; 发绿色荧光的胚胎中ALR基因同时存在。因此，由IRES连接标记基因和目的基因, 以标记基因指示目的基因的表达, 可简化检测目的基因的繁琐手段; 用筛选的转基因早期胚胎进行移植, 可提高制备转基因动物的效率。

绵羊; 转基因; 体细胞; 核移植

1997年 Wilmut et al (1997)利用核移植技术,成功的克隆了绵羊(Ovis aries)Dolly, 促进了体细胞基因转移和……