林志川 李建国 吴春暖 沈洪武 邹宗楷

·论著·

RUNX3、CyclinD1在胰腺癌组织中的表达及临床意义

林志川 李建国 吴春暖 沈洪武 邹宗楷

目的检测RUNX3、CyclinD1蛋白在胰腺癌组织中的表达，分析其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测47例胰腺癌、18例胰腺囊腺瘤及12例正常胰腺组织中RUNX3和CyclinD1蛋白的表达，分析它们与临床病理参数间的关系。结果胰腺癌、胰腺囊腺瘤和正常胰腺组织的RUNX3蛋白阳性表达率分别为57.4%(27/47)、94.4%(17/18)、100%(12/12)；CyclinD1蛋白阳性表达率分别为72.3%(34/47)、44.4%(8/18)、8.3%(1/12)。胰腺癌RUNX3阳性表达与患者性别、年龄无关，与胰腺癌的临床分期、淋巴结转移、分化程度呈负相关(P<0.05)。CyclinD1阳性表达与患者性别、年龄无关，与胰腺癌临床分期、淋巴结转移、分化程度呈正相关(P<0.05)。胰腺癌组织RUNX3与CyclinD1的表达呈负相关(r=-0.375,P=0.009)。结论胰腺癌组织中RUNX3呈低表达，Cyclin D1呈过表达，它们均与胰腺癌的发生、发展有关。

胰腺肿瘤; RUNX3; CyclinD1; 免疫组织化学

胰腺癌的发生、发展是一个多种癌基因和抑癌基因参与的过程。RUNX3是RUNTt家族中最近受到广泛关注的基因，定位于人染色体1p36.1，其在人类多种消化系统肿瘤的发生过程中起重要作用而倍受关注[1-3]。细胞周期素CyclinD1已被证实为原癌基因，作为限制调控G1期过程中最重要的正调控基因，其过度表达导致细胞周期调控异常,从而促使肿瘤发生。本研究检测胰腺癌组织中RUNX3、CyclinD1蛋白的表达，分析它们与临床病理参数间的关系。

材料与方法

一、材料

选取我院2004年至2010年间手术切除的胰腺癌组织标本47例，男26例，女21例，年龄33～82岁，中位年龄54岁。所有标本均经病理学证实，按国际抗癌联盟(UICC)和美国肿瘤联合委员会(AJCC)关于胰腺癌的临床病理TNM分期(第6版)，其中Ⅰ期1例，Ⅱ期22例，Ⅲ期22例，Ⅳ期2例；低分化17例，中分化16例，高分化14例。所有患者术前均未接受放疗和化疗。同时取18例胰腺囊腺瘤及12例正常胰腺组织标本(包括5例胰腺外伤和7例非肿瘤性的良性病变距病灶2 cm以外的正常胰腺组织)作为对照。

二、RUNX3及Cyclin D1蛋白检测

采用免疫组化SP法。鼠抗人RUNX3一抗购自北京博奥森生物技术有限公司，鼠抗人CyclinD1一抗购自福州迈新生物技术有限公司，按试剂盒说明书操作。每张切片在400倍显微镜下观察5个视野，每个视野计数200个细胞。RUNX3阳性细胞为胞质有棕黄色颗粒沉着或被染成棕黄色。根据阳性细胞百分率及染色深浅分级，参照Ito等[4]方法评分。Cyclin D阳性细胞为细胞核着色或胞质胞核同时着色，单纯胞质着色视为阴性，参照Fromowitz等[5]方法评分。

三、统计学方法

所有数据用SPSS 13.0处理。阳性率比较采用χ2检验，RUNX3、Cyclin D1表达与临床病理参数的关系采用Fisher′s精确检验，RUNX3、CyclinD1表达相关性分析运用PERSON方法。P<0.05为差异具有统计学意义。

结 果

一、 RUNX3、Cyclin D1蛋白的表达及其相关性

胰腺癌、胰腺囊腺瘤和正常胰腺组织的RUNX3阳性表达率分别为57.4%(27/47)、94.4%(17/18)、100%(12/12)，RUNX3在正常胰腺、胰腺囊腺瘤和胰腺癌中的表达依次下调(P<0.05,图1a、b、c)。胰腺癌、胰腺囊腺瘤及正常胰腺组织的Cyclin D1蛋白阳性表达率分别为72.3%(34/47)、44.4%(8/18)、8.3%(1/12),胰腺癌组织Cyclin D1的表达率明显高于正常胰腺和胰腺囊腺瘤(P<0.05,图1d、e、f)。

RUNX3阴性表达的20例胰腺癌中有19例Cyclin D1呈阳性表达，而RUNX3阳性表达的27例胰腺癌中有12例Cyclin D1阴性表达，胰腺癌组织RUNX3与Cyclin D1的表达呈显著性负相关(r=-0.375,P=0.009)。

图1RUNX3和Cyclin D1蛋白在胰腺癌(a、d)、囊腺瘤(b、e)和正常胰腺组织(c、f)中的表达(免疫组化 ×400)

二、 RUNX3、Cyclin D1表达与胰腺癌临床病理参数间的关系

RUNX3的表达与胰腺癌患者的年龄、性别无相关性；与胰腺癌的临床分期、淋巴结转移、分化程度呈负相关(P<0.05)。随着肿瘤分期的进展，分化程度下降，RUNX3表达逐渐下调(表1)。Cyclin D1表达与胰腺癌患者性别、年龄无相关性；与胰腺癌的临床分期、淋巴结转移、分化程度呈正相关(P<0.05)。随着肿瘤分期的进展，分化程度下降，其表达逐渐升高(表1)。

讨 论

人类RUNT相关转录因子3(human runt-related transcription factor 3, RUNX3)是哺乳动物RUNT家族进化的基础,目前研究主要集中在胃肠道等方面。钱安平等[6]分析，RUNX3蛋白在正常胃黏膜中的表达显著高于异型增生及胃癌，且异型增生的表达又高于胃癌。Sakakura等[7]研究表明，RUNX3可在一定程度调控细胞黏附、增殖和凋亡等与转移相关的基因表达，提示RUNX3基因作为一个抑癌基因参与肿瘤的发生、发展。

表1RUNX3、CyclinD1阳性表达与胰腺癌临床病理参数的关系

病理参数例数RUNX3阳性例数(%)P值CyclinD1阳性例数(%)P值性别0.5960.579 男2618(69.2)14(53.8) 女2116(76.2)13(61.9)年龄(岁)0.3990.483 <4054(80.0)4(80.0) 40～602419(79.2)14(58.3) >601811(61.1)9(50.0)分化程度0.0060.0005 高146(42.9)13(92.9) 中1612(75.0)10(62.5) 低1716(94.1)4(23.5)淋巴结转移0.0440.0009 无2515(60.0)20(80.0) 有2219(86.4)7(31.8)TNM分期0.0280.002 Ⅰ/Ⅱ2414(58.3)19(79.2) Ⅲ/Ⅳ2320(86.9)8(34.8)

Cyclin D1是细胞周期素家族中与肿瘤最为密切的成员，可促使细胞周期变化[8]。丁俊等[9]报道，Cyclin D1在胆囊炎、胆囊良性瘤和胆囊癌组织中表达率逐级升高，其表达与胆囊癌分化程度、临床分期、淋巴结转移及周围组织浸润有关。姜影等[10]报道，RUNX3与Cyclin D1在乳腺癌中蛋白表达呈负相关。

本结果显示，RUNX3蛋白在正常胰腺组织、胰腺囊腺瘤及胰腺癌组织中的表达依次下调，胰腺癌伴淋巴转移及Ⅲ～Ⅳ期患者的RUNX3表达较无淋巴结转移及Ⅰ～Ⅱ期患者明显下降，与我们前期报道的肝癌组织RUNX3表达结果类似[11]。提示RUNX3与恶性肿瘤病理演变高度相关。

本结果还显示，Cyclin D1蛋白在正常胰腺组织、胰腺囊腺瘤及胰腺癌组织中的表达依次增加，且与胰腺癌临床分期、淋巴结转移、分化程度相关，与丁俊等[9]在胆囊癌的研究结果一致，提示Cyclin D1过表达与胰腺癌病程进展有关。进一步相关分析表明，胰腺癌的RUNX3与Cyclin D1表达明显呈负相关，表明作为下游基因的Cyclin D1可能与RUNX3基因关系密切，两者表达异常最终导致细胞周期调控系统的平衡紊乱。

[1] Ito K,Liu Q,Salto-Tellez M,et al.RUNX3,a novel tumor suppressor is frequently inactivated in gastric cancer by protein mislocalization.Cancer Res,2006,66:3345-3351.

[2] Tong DD,Jiang Y,Li M,et al.RUNX3 inhibits cell proliferation and induces apoptosis by TGF-beta-dependent and independ entmechanisms in human colon carcinoma cells.Pathobiology,2009,76:163-169.

[3] Sugiura H,Ishiguro H,Kuwabara Y,et al.Decreased expression of RUNX3 is correlated with tumor progression and poor prognosis inpatients with esophageal squamous cell carcinoma.Oncol Rep,2008,19:713-719.

[4] Ito K,Liu Q,Salto-Tellez M,et al.RUNX3,a novel tumor suppressis is frequently inactivated in gaslric cancer by protein mislocalization.Cancer Res,2005,65:7743-7750．

[5] Fromowitz FB,Viola MV,Chao S,et al.Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Human Pathal,1987,18:1268-1275.

[6] 钱安平，赵晶，肖玉平，等.胃癌组织中RUNX3与mP53表达的关系及意义.解剖科学进展,2009,15:365-369.

[7] Sakakura C,Hasegawa K,Miyagawa K,et al.Possible involvement of RUNX3 silencing in the peritoneal metastases of gastric cancers.Clin Cancer Res,2005,11:6479-6488.

[8] 李伟华，吴剑宏，高纯，等.结直肠癌细胞主要Cyclins(D1、E、A、B1)表达类型与其生物学行为的关系.中华实验外科杂志，2010,27：1060-1062.

[9] 丁俊，李可为，王坚，等.P27、Cyclin D1、Cyclin E在原发性胆囊癌中的表达及临床意义.肝胆胰外科杂志，2009，21：191-195.

[10] 姜影，佟丹丹，张颖，等.乳腺癌中RUNX3、cyclin D1和p27kip1蛋白的表达及其意义.中国肿瘤，2007，16：442-444.

[11] 卢燕辉，李建国，邹宗楷，等.RUNX3基因在不同肝组织中的蛋白表达水平及其意义.中华实验外科杂志，2010,27：729-731.

2010-09-17)

(本文编辑：吕芳萍)

ExpressionsandsignificancesofRUNX3andCyclinD1inpancreaticcarcinoma

LINZhi-chuan,LIJian-guo,WUChun-nuan,SHENHong-wu,ZOUZong-kai.

DepartmentofHepatobiliarySurgery,ZhangzhouHospital,FujianMedicalUniversity,Zhangzhou363000,China

LIJian-guo,Email:jjxln649@163.com

ObjectiveTo investigate the expressions of RUNX3 and CyclinD1 in pancreatic carcinoma and their significance.MethodsExpressions of RUNX3, CyclinD1 in 47 cases with pancreatic carcinoma, 18 cases with cystadenoma of pancreas and 12 normal pancreas cases were detected by immunohistochemistry, and the relationship between their expressions and clinicopathological parameters was analyzed.ResultsThe positive expression rates of RUNX3 in pancreatic carcinoma, cystadenoma of pancreas, normal pancreas cases were 57.4%(27/47), 94.4%(17/18), 100%(12/12); the positive expression rates of CyclinD1 in pancreatic carcinoma, cystadenoma of pancreas, normal pancreas cases were 72.3%(34/47), 44.4%(8/18), 8.3%(1/12). RUNX3 expression was not related to the age and sex, but it was negatively associated with clinical staging, lymph node metastasis, the differentiation degree (P<0.05)．CyclinD1 expression was not related to the age and sex, but it was positively associated with clinical staging, lymph node metastasis, the differentiation degree (P<0.05)．The expression of RUNX3 and CyclinD1 was negatively associated (r=-0.375,P=0.009).ConclusionsThe expression of RUNX3 is decreased in pancreatic carcinoma. The expression of CyclinD1 is increased in pancreatic carcinoma. They may play an important role in the carcinogenesis and progression of pancreatic carcinoma.

Pancreatic neoplasms; RUNX3; CyclinD1; Immunohistochemistry

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2011.04.013

福建省自然科学基金(2009J01326)

363000 福建漳州，福建医科大学附属漳州市医院肝胆外科(林志川、李建国)，病理科(吴春暖、沈洪武、邹宗楷)

李建国，Email：jjxln649@163.com