李 洋 钱 明 井宏宇 钱东华 (吉林大学第一医院呼吸内科，吉林 长春 3002)

HSV-TK逆转录病毒包装细胞系建立及病毒滴度测定

李 洋 钱 明1井宏宇 钱东华 (吉林大学第一医院呼吸内科，吉林 长春 130021)

目的 建立HSV-TK逆转录病毒包装细胞系并获得高产病毒的细胞株。方法 将TK基因与逆转录表达载体PLEGFP-N1连接后转染到包装细胞PA317中，经G418及荧光蛋白双重筛选得到高产病毒的细胞株。结果 经酶切鉴定成功构建PlEGFP-N1-TK重组载体，含HSV-TK基因重组逆转录病毒包装细胞PA317成功建立，经病毒滴度测定获得高产病毒的PA317/TK细胞株。结论 制备的重组病毒具有感染靶细胞的活性，为进一步应用HSV-TK基因进行肺癌的自杀基因治疗研究奠定基础。

HSV-TK;逆转录病毒;包装细胞PA317

恶性肿瘤的基因治疗是现代医学领域的研究热点，其中自杀基因疗法已经成为极富希望的肿瘤治疗新方法。自杀基因有多种，其中研究较多的主要有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)两种自杀基因系统。本实验应用HSV-TK/GCV系统将TK基因与逆转录表达载体PLEGFP-N1连接后转染到包装细胞PA317中，经筛选得到高产病毒的细胞株，为HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗肺癌奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 载体、菌种和细胞株 pGEM-5Zf-HSV-TK，日本东京大学医学部苏肃博士慧赠;PLEGFP-N1，吉林大学第一医院中心研究室保存;PA317细胞，购自Clontech公司;小鼠成纤维细胞(NIH3T3)细胞，购自中国科学院细胞库;大肠杆菌DH5α，由东北师范大学遗传病研究所实验室保存。

1.1.2 主要试剂 脂……