APP下载

银杏叶复方制剂对实验性脾虚证模型小鼠内脏器官发育及其抗氧化酶活性的影响研究

2011-11-18李焰杨小燕王华周孝琼王千金杨汇

湖北农业科学 2011年15期
关键词:内脏器官利血平抗氧化酶

李焰 杨小燕 王华 周孝琼 王千金 杨汇

摘要:采用利血平复制脾虚证小鼠模型,观察银杏叶复方制剂对实验性脾虚证模型小鼠内脏器官发育及其抗氧化酶活性的影响。结果表明,①银杏叶复方组小鼠胃、肾的指数较脾虚模型组有所提高但差异不显著(P>0.05);银杏叶复方组小鼠小肠、脾的指数显著高于脾虚模型组(P<0.05),与对照组差异不显著(P>0.05);脾虚模型组小鼠的肝、肺指数显著高于银杏叶复方组(P<0.05),银杏叶复方组小鼠的肝、肺指数与对照组差异不显著(P>0.05),提示银杏叶复方有促进脾虚小鼠脾胃发育和促进肝脏的解毒作用,对脾虚模型小鼠的肾、肺功能亦有改善作用。②银杏叶复方组小鼠脾脏、肾脏中MDA含量较脾虚模型组显著降低(P<0.05),而肝脏组织中SOD和GSH-Px含量较脾虚模型组显著提高(P<0.05),同时脾脏、肾脏和肝脏中T-AOC含量较脾虚模型组显著提高(P<0.05)。提示银杏叶复方对脾虚小鼠的脾脏、肾脏和肝脏的功能有良好的保护作用。

关键词:银杏叶复方;脾虚证;利血平;内脏器官;抗氧化酶;小鼠

中图分类号:S816.79文献标识码:A文章编号:0439-8114(2011)15-3120-04

Effect of Ginkgo biloba Compound on Development of Visceral Organs and Antioxidase Activity of Spleen Deficiency Mouse

LI Yan1,2,YANG Xiao-yan1,2,WANG Hua1,2,ZHOU Xiao-qiong1,3,WANG Qian-jin1,YANG Hui1

(1.Collge of Life Science of Longyan University, Longyan 364000,Fujan ,China;

2. Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, Educational Commission of Fujian Province,Longyan 364000,Fujan ,China;

3.Fujian Engineering Research Center for Prevention and Control of Zoonosis and Viral Diseases; Longyan 364000,Fujan ,China)

Abstract: Spleen deficiency mouse induced by reserpine were used to investigate the effect of ginkgo compound on the development of visceral organs and their antioxidase activity. The experimental mouse were divided into three groups including ginkgo compound group (GC), spleen deficiency group (SD) and control group (Control). The results suggested that ginkgo biloba compound could promote the development of spleen and stomach and accelerate the detoxication of liver, and also improve the function of kidney and lung of spleen deficiency mouse. The indexes including stomach, kidney, small intestine and spleen in GC appeared higher than those in SD while the indexes of small intestine and spleen were significantly higher, but the indexes of liver and lung in GC were significantly lower than in SD, whereas no significant difference among all indexes was found between GC and the control group. Compared with SD group, it was found that the MDA content in the spleen and kidney of GC group was significantly lower, while the SOD and GSH-Px content in liver and the T-AOC content in spleen, kidney and liver were significantly higher.

Key words: ginkgo biloba compound; spleen deficiency syndrome; reserpine; visceral organs; antioxidase; mice

银杏(Ginkgo biloba L.)是现存种子植物中最古老的孑遗植物[1]。银杏叶被用作药物已有500余年的历史,早在宋朝我国民间就已使用银杏叶治疗哮喘和支气管炎。现代药理学研究表明,银杏叶及其提取物中含有丰富的黄酮类活性物质和萜内酯等有效成分,具有抗氧化、清除体内有毒游离自由基、扩张血管、保护机体组织和耐缺氧、抗脂质过氧化、改善神经调节功能等作用[2]。我国不仅是银杏资源的古国,而且是银杏资源大国,拥有量占全世界总量的70%以上,具有较大的开发优势,但对银杏叶的开发利用尚处于起步阶段,落后于世界上一些先进国家,较长时间停留在叶子出口或提取粗产品的水平,造成了国有资源的浪费[3]。银杏叶的食用安全性较高[4],目前临床上银杏叶制剂和复方银杏叶制剂多用于治疗心血管疾病,有关银杏叶及其复方制剂用于畜禽疾病防治且作为畜禽饲料添加剂的报道较少见,并且仅停留在单方制剂(银杏叶提取物)这个小范围内,缺乏在银杏叶复方制剂方面的深入研究。复方中药是单味药物治病的进一步发展,既能发挥单味药的特长,又能弥补单味药的不足,更能增强效力。在大力提倡绿色食品的今天,中草药具有的天然性、毒副作用小、不易产生耐药性等优势是抗生素和化学合成药物所无法比拟的。因此,本试验在课题组前期研究的基础上,利用银杏叶与中草药(黄芪、白术、党参、茯苓)配制成银杏叶复方制剂,通过药理学试验,对小鼠腹腔注射利血平复制脾虚证模型小鼠,观察银杏叶复方制剂对脾虚小鼠内脏器官发育情况的影响,并结合银杏叶复方制剂对脾脏、肾脏和肝脏的抗氧化能力进行比较研究,为科学利用我国银杏叶这一优势资源、研究一种以银杏叶为主的中草药饲料添加剂提供理论依据。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1银杏叶复方制剂的制备银杏叶干粉由长沙博健生物科技有限公司提供,产品标准号:Q/ADPG001-2008;黄芪、党参、白术、茯苓购于福建紫金医药连锁有限公司,质量符合中华人民共和国兽药典(2005版)标准。上述5种药物按照质量比为

5∶2∶1∶1∶1的比例混匀,采用水煮醇提的方法,首先分别用8倍、6倍和5倍量水煎煮1 h,混合煎煮液并浓缩至100 mL,再将煎煮液分别用75%和85%的乙醇混合过夜,并调节pH值至7.0左右,去除沉淀后用旋转蒸发仪浓缩,制得每毫升含1 g生药的浓缩液。

1.1.2利血平注射液(1 mg/mL)广东邦民制药有限公司生产,产品批号080307。

1.1.3试验动物6周龄KM种小鼠,雌性,体重23~28 g,购于福建医科大学实验动物中心。

1.1.4实验性脾虚证模型小鼠的建立依据中医脾虚证诊断参考标准,选择利血平造脾虚模型,使用剂量参考文献[5]进行。通过动物试验,以小鼠便溏、食欲减少、消瘦、呆立、群聚、活动明显减少等明显脾虚体征为脾虚证模型复制成功,确定小鼠脾虚证模型使用剂量为0.2 mL/kg。

1.2试验动物分组

KM种小鼠60只,雌性,随机分为对照组、脾虚模型组和银杏叶复方组。每组设5个重复,每个重复4只小鼠。对照组给予生理盐水,分别灌胃(0.3 mL/d)和腹腔注射(0.2 mL/kg);脾虚模型组给予生理盐水灌胃(0.3 mL/d)和腹腔注射利血平(0.2 mL/kg),于第三天出现与文献报道相符的症状;银杏叶复方组分别给予银杏叶复方制剂灌胃(0.3 mL/d)和腹腔注射利血平(0.2 mL/kg)。每天给药1次,连续14 d。

1.3测定指标与方法

1.3.1小鼠内脏器官指数测定小鼠在结束造模后禁食一夜,于次日上午从每个重复各取1只小鼠,断颈处死后分别剖取心、肝、肺、脾、肾、胃和小肠,用滤纸吸干血迹并称重,按以下公式计算内脏器官指数:

内脏器官指数=内脏器官重量/体重×100%。

1.3.2小鼠肝脏、脾脏和肾脏组织抗氧化性能测定小鼠在结束造模后禁食一夜,于次日上午从每个重复各取一只小鼠,断颈处死后分别剖取肝脏、脾脏和肾脏,用生理盐水制成20%的组织匀浆待测。丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)含量均用购自南京建成生物工程研究所的试剂盒测定,试剂配制和操作步骤按说明书进行。

1.4数据处理

采用SPSS 10.0软件进行One-Way ANOVA分析和Duncan氏多重比较,结果以平均值±标准差(x±s)表示。

2结果与分析

2.1银杏叶复方制剂对脾虚模型组小鼠内脏器官指数的影响

由表1可见,银杏叶复方组小鼠胃和肾的器官指数均高于脾虚模型组(P>0.05),但低于对照组(P<0.05);银杏叶复方组小鼠小肠和脾的指数均显著高于脾虚模型组(P<0.05),与对照组差异不显著(P>0.05);脾虚模型组的小鼠肝脏指数显著高于对照组和银杏叶复方组(P<0.05),银杏叶复方组与对照组的小鼠肝脏指数差异不显著(P>0.05);脾虚模型组的小鼠肺脏指数显著高于银杏叶复方组和对照组(P<0.05),银杏叶复方组的小鼠肺脏指数与对照组相比差异不显著(P>0.05)。

2.2银杏叶复方制剂对脾虚模型组小鼠脾脏、肾脏和肝脏组织抗氧化性能的影响

2.2.1银杏叶复方制剂对脾虚模型组小鼠脾脏组织抗氧化性能的影响由表2可见,脾虚模型组小鼠脾脏MDA含量极显著高于对照组(P<0.01),SOD、GSH-Px、T-AOC含量均极显著低于对照组(P<0.01)。银杏叶复方组小鼠脾脏MDA含量极显著低于脾虚模型组(P<0.01),与对照组相比差异不显著(P>0.05);银杏叶复方组小鼠脾脏SOD、GSH-Px含量较脾虚模型组有所提高但差异不显著(P>0.05);银杏叶复方组小鼠脾脏T-AOC含量较脾虚模型组显著提高(P<0.05)。

2.2.2银杏叶复方制剂对脾虚模型组小鼠肾脏组织抗氧化性能的影响由表3可见,脾虚模型组小鼠肾脏MDA含量显著高于对照组(P<0.05),SOD、GSH-Px含量均低于对照组,但差异不显著(P>0.05),T-AOC含量显著低于对照组(P<0.05)。银杏叶复方组小鼠肾脏MDA含量较脾虚模型组显著降低(P<0.05),与对照组含量差异不显著(P>0.05);银杏叶复方组小鼠肾脏SOD、GSH-Px含量与脾虚模型组和对照组相比差异不显著(P>0.05),银杏叶复方组小鼠肾脏T-AOC含量较脾虚模型组显著提高(P<0.05),与对照组相比差异不显著(P>0.05)。

2.2.3银杏叶复方制剂对脾虚模型组小鼠肝脏组织抗氧化性能的影响由表4可见,脾虚模型组小鼠肝脏MDA含量极显著高于对照组(P<0.01),SOD、GSH-Px、T-AOC含量均极显著低于对照组(P<0.01)。银杏叶复方组小鼠肝脏MDA含量与脾虚模型组相比差异不显著(P>0.05),SOD和GSH-Px含量较脾虚模型组极显著提高(P<0.01),T-AOC含量较脾虚模型组也显著提高(P<0.05)。

3讨论

3.1银杏叶复方制剂对脾虚模型组小鼠内脏器官指数的影响

银杏叶复方组小鼠小肠和脾的指数均显著高于脾虚模型组且与对照组差异不显著,显示银杏叶复方制剂有促进脾虚小鼠消化器官和免疫器官发育的作用。肝脏是重要的解毒器官,研究发现脾虚证可导致模型动物的肝坏死、变性[6],本试验中脾虚模型组的肝脏指数显著高于对照组和银杏叶复方组,而银杏叶复方组与对照组的肝脏指数差异不显著,一方面可能是利血平导致脾虚模型小鼠肝脏代偿性增生的结果,同时与银杏叶复方制剂促进小鼠肝脏解毒作用有关。脾虚证的影响学研究表明,脾阳虚证肺纹理的主要改变为模糊、紊乱、扭曲、中断,并有颗粒斑点及网状阴影[7]。本试验中脾虚模型组的肺脏指数显著高于对照组和银杏叶复方组,器官指数是检测反应物质可能对脏器有毒性作用的指标之一,试验结果表明利血平亦可导致脾虚模型小鼠肺代偿性增生,银杏叶复方组的小鼠肺指数与对照组相比差异不显著,表明银杏叶复方制剂对脾虚模型小鼠的肺功能有改善作用。

“脾胃”是中医学上的名称,一般泛指人体的整个消化系统,其中主要包括胃肠道等重要器官。“脾虚证”是以消化功能低下为主的多器官和多系统功能减弱的综合病理变化[8],故脾胃内伤是百病由生的主要内容。试验表明,银杏叶复方制剂可促进脾虚小鼠脾胃发育和促进肝脏的解毒作用,对脾虚模型小鼠的肾和肺功能亦有改善作用,分析认为银杏叶复方制剂的这种作用与方中各种有效成分有关。方中银杏叶性味甘、苦、涩、平,归心、肺经,有敛肺、平喘、活血化瘀、止痛之功效;黄芪性味甘、温,归肺、脾经,有补气固表之功效,可促进血清和肝脏蛋白质代谢,同时黄芪中的主要成分——黄芪多糖可改善脾虚小鼠的消化吸收功能[9];党参,性味甘、平,入脾、肺经,具健脾补肺、益气生津之功;白术、茯苓二药均能益气健脾,白术苦温而善于燥湿,茯苓甘淡而善于渗湿,合而用之,一燥一湿,健脾除湿,相辅相成,成为古今治疗脾气虚证及脾虚泄泻的经典小方和常用药材。中医五行理论认为心属火,脾属土,而火又生土,所以黄芪、党参、白术、茯苓配以银杏叶相得益彰。

3.2银杏叶复方制剂对脾虚模型组小鼠肝脏、脾脏和肾脏组织抗氧化性能的影响

本试验采用利血平复制小动物脾虚模型是一种成熟的方法,研究表明脾虚动物存在体内过氧化与抗氧化之间的平衡失调,脾虚证患者的抗氧化酶(GSH-Px、SOD等)活性降低,MDA含量升高[10-12]。试验中脾虚模型组小鼠肝、脾和肾脏的GSH-Px、SOD的活性均低于对照组,而MDA含量均高于对照组,这表明脾虚模型的复制是成功的。

正常情况下机体抗氧化体系处于动态平衡状态,但在内外因的作用下这种平衡被破坏,使机体产生过多的氧自由基,氧自由基可攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸,引发脂质过氧化反应,从而形成脂质过氧化物,如MDA。MDA的含量可反映机体脂质过氧化物的生成速率和强度,间接反映组织氧化损伤程度。机体对活性氧和自由基的清除主要由SOD、GSH-Px和T-AOC等酶促系统的活性增强来完成。因此,机体抗氧化能力可通过血液中GSH-Px、SOD和T-AOC等指标来体现。试验中银杏叶复方组小鼠脾脏、肾脏中MDA含量较脾虚模型组显著降低,而肝脏组织中SOD和GSH-Px含量较脾虚模型组显著提高,同时脾脏、肾脏和肝脏T-AOC含量较脾虚模型组显著提高,提示银杏叶复方制剂对脾虚小鼠的脾脏、肾脏和肝脏的功能有良好的保护作用。银杏叶复方制剂对脾虚证小鼠这种良好的预防效果,与方中银杏叶等各味药的抗氧化作用有关。本试验采用水煮醇提法,最大程度地提取了方中各味药物的有效成分,其中银杏叶提取物对生物体所产生的活性氧具有很强的清除作用,可以延缓衰老[13];通过补充外源性抗氧化物质或促进机体产生内源性抗氧化物质,有效拮抗自由基对细胞膜的损伤,是一种高效的自由基清除剂[14];同时银杏叶提取物还可参与调解和提高过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶的活性,从而加快了自由基的清除[15];黄芪总黄酮是黄芪的主要活性成分之一,具有抗氧化、抗肿瘤、抗突变等多种生物学功能[16];党参具有上调抗氧化酶表达作用,能抵抗氧自由基损伤[17];白术和茯苓均有抗氧化、清除自由基的作用[18,19]。上述药物按一定比例组合,可综合发挥其良好的抗氧化作用。

综上所述,银杏叶复方制剂具有促进脾虚模型小鼠脾胃发育和肝脏解毒的作用,对脾虚模型小鼠的肾和肺功能亦有改善作用。抗氧化试验表明,银杏叶复方制剂对脾虚模型小鼠的脾脏、肾脏和肝脏的功能有良好的保护作用。

参考文献:

[1] BTADLY P, WARREN S. Ginkgo biloba: a living fossil[J]. Am J Med,2000,108(4): 341-342.

[2] 王桂英,高英梅,郝玉杰,等. 银杏叶提取物药理作用的研究进展[J].河北中医,2009,31(6):944-945.

[3] 梁淑轩,孙汉文.银杏叶资源开发利用研究进展[J].河北大学学报(自然科学版),2003,26(2):204-207.

[4] 张卫明,顾龚平,史劲松. 银杏叶食用安全性的毒理学评价[J]. 南京师范大学学报(自然科学版),2005,28(1):80-83.

[5] 金敬善.脾虚证动物模型的实验研究进展[J].中国中西医结合脾胃杂志,1999,7(2):65.

[6] 危北海,王仲德.脾胃疾病虚证的鉴别诊断[J].浙江中医杂志,1984,19(11):507-508.

[7] 刘庆寿.脾虚证的影响学表现[J].华夏医药,2008(1):53-56.

[8] 吴咸中,高金亮.脾虚证的现代研究[M].天津:天津科技翻译出版公司,1992.255-256.

[9] 罗燕,谷新利,惠文巧.黄芪多糖对脾虚小鼠消化吸收功能的影响[J].黑龙江畜牧兽医,2009(9):110-112.

[10] 陈达理,周立红.四种虚证患者血清丙二醛含量变化[J].山东中医学院学报,1995,19(1):41.

[11] 张庆荣,谷峰,赵世芬.脾虚对哮喘氧化抗氧化平衡改变的影响[J].辽宁中医杂志,1999,26(12):574-575.

[12] 章梅,邱根全,夏天.脾虚患者脂质过氧化和红细胞免疫功能关系[J].安微中医学院学报,2001,20(2):43-45.

[13] BEKERECIO■LU M,TERCAN M, OZYAZGAN L. The effect of Ginkgo biloba extract(Egb 761)as a free radical scavenger on the survival of skin flaps in rats. A comparative study[J].Scand J Plast Reconstr Surg Hand Surg,1998,32(2):135-139.

[14] 张晶晶,石少慧,巴伟松,等.银杏叶提取物对肾急性缺血再灌注损伤家兔抗氧化能力的影响[J].河北职工医学院学报,2005,22(1):4-5.

[15] 牛英鹏,屈建莹.银杏叶提取物对大鼠抗氧化能力的影响[J].化学研究,2006,17(3):90.

[16] 杨映雪,陈建业,费中海,等.黄芪总黄酮对辐射损伤小鼠的防护作用研究[J].重庆医科大学学报,2010,35(4):504-507.

[17] 黄丽亚,叶嗣颖.党参注射液上调抗氧化酶表达作用的实验研究[J].中国老年学杂志,2006,26(1):70-71.

[18] 李怀荆,郭忠兴,毛金军,等.白术水煎剂对老年小鼠抗衰老作用的影响[J].佳木斯医学院学报,1996,19(1):9-11.

[19] 陈新谦,金有豫.延缓衰老药物[M].北京:人民卫生出版社,1998.

猜你喜欢

内脏器官利血平抗氧化酶
利血平通过神经免疫代谢信号传导和MEK1/2激活改善鸡肠道中的肠杆菌科抵抗力
不停用利血平对高血压患者围手术期循环及相关并发症的影响
高效液相色谱-串联质谱法测定羊内脏器官中莱克多巴胺
不同喂料模式对保育猪内脏器官发育影响的研究
遮阳网覆盖对枇杷幼果抗寒性影响机理初探
不同养殖环境中的中华绒螯蟹组织抗氧化剂水平和抗氧化酶活力
芎麻汤及其提取物对利血平低5-HT型偏头痛模型小鼠的影响
HPLC 法测定利血平注射液中利血平的含量