许瑞利 梁俊昌 朱瑞良



利用RT-PCR对病料中猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测

许瑞利①②梁俊昌②朱瑞良①

（①山东农业大学动物科技学院 泰安 271018 ②山东省枣庄市市中区畜牧兽医局）

本试验对枣庄市中区6个乡镇及周边地区的54个不同规模猪场及散户所采集的172份临床疑似“猪高热病”样品进行了检测，结果发现，枣庄地区检出高致病性PRRSV阳性占56.4%(97/172)，CSFV阳性占31.4%(54/172)。PRRSV和CSFV的混合感染占12.2%(21/172)，说明枣庄地区大部分猪场已经普遍存在PRRSV感染。

PRRSV 多重 RT-PCR CSFV 感染

近年来，随着枣庄地区生猪养殖量的不断增加，猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory synduome, PRRS)发生的越来越频繁，危害也越来越严重。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料 发病猪病料采集时间为2008~2010年，采集枣庄市畜牧兽医局兽医实验室化验门诊病历，分别来自枣庄市中区6个乡镇及周边地区的54个不同规模猪场及农村散养户“疑似猪高热病”病猪或血样，共172份病料，包括病猪心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、胎儿组织、胎盘等脏器或血液样品。每一病例取部分病变组织3.0g左右，加少量灭菌PBS，用灭菌研磨器研磨至糊状，再加灭菌PBS释成乳剂，置-70℃冰箱反复冻融3次(血清样品无需研磨反复冻融)，3000~4000rpm，4℃离心5min，取上清置-20℃冰箱保存。

1.1.2 主要试剂 TRIzol®Reagent 购自Invitrogen 公司，One Step RNA RT-PCR试剂盒(AMV)为宝生物工程(大连)有限公司产品；DL2000 Marker，购自济南辰飞生物工程公司；其他化学试剂如氯仿、异丙醇、无水乙醇等，均为国产分析纯产品。

1.1.3 主要仪器 ELX800型酶标仪(美国BioTek公司)，TGL-16G型常温离心机(上海安亭科学仪器厂制造)，PCR仪、Centrifuge 5417R台式冷冻离心机(德国Eppendorf公司)，JA1003型电子天平(上海精……