禽白血病J亚型的诊断试验
2011-10-26王林川邓月嫦姚晓辉李建宏叶健聪黄鹏华
刘 玲 王林川 邓月嫦 姚晓辉 李建宏 叶健聪 黄鹏华
禽白血病病毒(ALV) 是一种反转录病毒,呈圆形或椭圆形,有囊膜,直径约80~120 nm。根据囊膜蛋白的抗原性不同,ALV现有A、B、C、D、E、F、G、H、I、J等亚群,仅A~E和J亚群从鸡分离到,其余亚群见于其他鸟类。A、B、C、D、J可引起经典的以淋巴样细胞瘤为主的白血病,也有少数表现其他细胞类型的肿瘤,如纤维素性肉瘤,红细胞增生病、骨瘤等。A、B和J亚群为发生于田间的外源性病毒,而C、D亚群很少发生于田间,E亚群病毒为极普遍存在的内源性白血病病毒。ALV可垂直传播又可水平传播。ALV-J亚群是所有外源病毒中传播最迅速及致病能力最强的。它也可以水平传播发生于任何年龄的鸡群中,研究证明ALV- J病毒在肉鸡早期(4~6周龄)传播效率较高。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 病料 来自广东某低免蛋鸡场。无菌采集病鸡的血并分离血清;肝、脾、卵巢等。
1.1.2 试剂 ELSA试剂盒子均购自美国IDEXX公司,ALV-J及ALV-AB的批次分别为09268-CF650及09257-ME477。血液及病毒的DNA/RNA提取试剂盒购自BIOMEGA公司。Ex-Taq酶购于大连宝生物工程公司。
1.1.3 仪器设备 酶标仪、洗板机、PCR仪等。
1.2 方法
1.2.1 临床及剖检观察病理变化 送检病鸡为26周龄,临床主要表现生长迟缓、产蛋下降。病鸡采血备用,按常规方法进行剖检观察、采集病料。
1.2.2 血清学检测 据临床及病理变化,送检病鸡,采血后用ELISA方法检禽白血病A、B亚型(ALV-A、B);禽白血病J亚型(ALV-J),按试剂盒说明书严格操作。
1.2.3 分子生物学 根据已发表的文献[2,3],设计PCR引物如表1所示,并由上海英骏生物技术有限公司合成。PCR引物设计选取的基因片段及目标片段大小见表2。……
