苗英彬，张未娟，邓志宏，曾丽明，杨瑞波，张 琛，赵少贞

（天津医科大学眼科中心屈光角膜科，天津300384）

近年来，视网膜色素上皮（retinalpigmentepithelium，RPE）细胞在近视发生中的作用已成为眼科研究中的热点。体外研究表明视黄酸可以调节RPE细胞分泌碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）、 转 化 生 长 因 子 β2（transfergrowth factor-β2，TGF-β2）等生长因子，而这些细胞因子都和近视的发生发展有着密切联系[1]。但RPE细胞内通过何种信号转导途径调节细胞因子的分泌尚未明确。本研究通过在培养的豚鼠RPE细胞加入全反式视黄酸和视黄酸β受体阻断剂LE540来观察其对细胞分泌bFGF和TGF-β2的影响，寻找控制人类近视发展的药物靶点。

1 材料与方法

1.1 主要仪器及试剂 CO2培养箱 (美国Forma公司）；倒置生物显微镜（日本Olympus公司）；培养板、培养瓶（美国Corning公司）；DMEM/F12培养基、胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）、胰蛋白酶（美国Gibco公司）；小鼠抗大鼠广谱细胞角蛋白（pan cytokeratin,PCK）单克隆抗体（1∶200）（武汉博士德公司）；LE540(日本 Wako)；bFGF、TGF-β2ELISA 试剂盒（美国ADL公司）。

1.2 豚鼠RPE细胞的培养及鉴定 2~3周龄健康普通级三色豚鼠4只，雌雄不限（购自北京维通利华实验动物技术有限公司），腹腔注射过量水合氯醛处死，摘除眼球，去除眼周组织，PBS冲洗，于含0.2 g/L庆大霉素的PBS中4℃浸泡20～30min后取出眼球用PBS冲洗2～3次，于装满PBS的培养皿中沿锯齿缘剪开眼球去除眼前节部分，去除玻璃体和神经视网膜层，置于干净平皿中撕下色素膜浸于0.25%的胰蛋白酶中37℃消化10～15min。加入培养液吹打，1 000 r/min离心5min，弃上清，加入培养液吹打，200目细胞筛过滤，收集于培养瓶中培养。原代培养用含20%FBS的DMEM/F12培养基，传代后用含10%FBS的培养基培养。……