朱德为，刘庚勋，李正贤

（1.解放军169医院病理科，湖南 衡阳 421002；2.湖南省师范大学第二附属医院，解放军163医院病理科，湖南 长沙 410003）

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，癌细胞的生长、浸润及转移均离不开新生血管及淋巴管的生成。VEGF是最重要的血管内皮刺激因子，肿瘤血管生成过程中发挥核作用[1]。本研究应用免疫组化En-visionTM和半定量RT-PCR法，检测乳腺癌和乳腺纤维腺瘤中VEGF蛋白及mRNAVEGF的表达情况，并分析其临床病理参数间的关系，旨在探讨VEGF蛋白和mRNA在乳腺癌侵袭和转移中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

所有病例均为我院2007年6月～2009年6月间临床资料完整的乳腺癌(均为浸润性癌)病例56例 ，年龄37～72岁,中位年龄为45.3岁,所有患者均接受手术治疗，术前未接受过放疗、化疗或免疫治疗，经病理确诊。组织学分级：I级15例，II级28例，III级13例。有淋巴结转移者35例,无淋巴结转移者21例；同时随机抽取同时期确诊的乳腺纤维腺瘤30例作对照组。标本分两份，一份经4%中性福尔马林固定,石蜡包埋,连续3 μm切片,常规HE染色及VEGF免疫标记。另一份迅速投入液氮中速冻,然后置于-70℃的冰箱保存备用。

1.2 免疫组化染色

即用型VEGF单克隆抗体、EnvisonTM试剂盒及DAB显色剂均购于福州迈新公司,染色步骤按试剂盒说明进行操作。以已知的试剂盒提供的VEGF阳性切片做阳性对照，以PBS液代替一抗作空白对照和用非免疫血清代替一抗的阴性对照。

1.3 阳性结果评定

VEGF以细胞膜或胞质出现明显的黄色或棕黄色颗粒视为阳性细胞。在奥林帕斯光学显微镜下观察阳性细胞比例和阳性着色深浅。……