胡春生，王延亮，卢育新，程晓晨，刘琳，张通，张庆林

1 军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京 100850

2 内蒙古工业大学化工学院，呼和浩特 010051

重组质粒pUDK-HGF的中试纯化工艺

胡春生1,2，王延亮1，卢育新1，程晓晨1，刘琳1，张通2，张庆林1

1 军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京 100850

2 内蒙古工业大学化工学院，呼和浩特 010051

pUDK-HGF是携带人肝细胞生长因子的裸质粒，目前已进入I期临床试验，因此需要大量符合药学规格的质粒DNA。文中建立了pUDK-HGF中试规模纯化制备的新工艺。流程包括：发酵、离心收获菌体、碱裂解、超滤浓缩碱裂解液、Sephacryl S-1000层析除去RNA并更换缓冲液、plasmidselect捕获超螺旋质粒DNA、琼脂糖凝胶6BFF除盐。新工艺可获得浓度为2.0 mg/mL、纯度在1.70以上的裸质粒原液，符合相关质量标准，并避免使用动物源性的酶及有毒试剂。

重组质粒，纯化，质量检测，肝细胞生长因子

Abstract:pUDK-HGF, the recombinant plasmid DNA encoding human hepatocyte growth factor (HGF), can treat ischaemic disease. A great quantity of pharmaceutical pUDK-HGF is needed. A pilot-scale production process of pUDK-HGF was established based on a new chromatographic media (plasmidselect), including fermentation, cell harvesting, alkaline lysis, ultrafiltration, RNA removing and buffer exchanging on Sephacryl S-1000, capturing supercoiled plasmid DNA with plasmidselect, and removing the salt with Sepharose 6BFF. The process does not use RNase enzyme and toxic solvents.

Keywords:recombinant plasmid, purification, hepatocyte growth factor

肝细胞生长因子 (Hepatocyte growth factor，HGF) 是一类多功能生长因子，具有刺激血管增生作用，通过局部肌肉注射携带HGF基因的质粒DNA可明显促进肢体急性缺血部位新生血管的形成，在临床上具有治疗缺血性疾病的应用前景[1]。

Zhang等[2]对质粒pUDK-HGF大规模纯化工艺进行了大量研究，工艺成熟，能生产药用级重组质粒pUDK-HGF注射液。其工艺是碱裂解后离心处理获得澄清碱裂解液，直接用Q-Sepharose XL阴离子交换层析捕获质粒DNA；再用Sephacryl S-1000分离除去RNA；用Source 15Q对质粒DNA进行精制。随着新填料 plasmidselect的出现，生产超螺旋质粒 DNA的工艺随之更新，因此本文建立新的pUDK-HGF纯化工艺，该工艺为碱裂解细菌后，用绸布滤去细胞碎片等絮凝物，获得碱裂解上清液；……