杨庆芳，宁官保，李俊达

（1.晋中职业技术学院，山西晋中030600；2.山西农业大学，山西太谷030801；3.武乡县畜牧兽医中心，山西武乡046300）

2008年2月以来，山西多个规模化猪场出现妊娠母猪流产、木乃伊胎、死胎和产弱仔，初生仔猪出现神经症状，给生产造成巨大损失。为查明引起该疫病发生的根本原因，我们采集了病死猪的脑、肺、肝、脾、肾等组织病料，对其进行了研磨与过滤处理，并对其病原菌进行了分离。最终从病死仔猪的脑、肺、肝组织病料中分离出1株疑似伪狂犬病病毒（PRV）的毒株，并对其进行了系统的鉴定。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 细胞 仓鼠肾传代细胞（BHK-21），购于中国兽医药品监察所。

1.1.2 血清 猪伪狂犬病中和试验标准阳性血清，购于中国兽医药品监察所；阴性猪血清，采自规模猪场非免疫健康猪，经gE鉴别ELISA诊断试剂盒检测均为阴性。

1.1.3 病料 无菌采集病死仔猪、流产胎儿的脑、肺、肝、脾、肾等组织置-70℃保存，供分离病毒用。用前将上述组织混合在一起于灭菌过的研钵内剪碎，用组织研磨器研磨，加入含青霉素、链霉素（终浓度各1 000单位/mL）的Hank’s液制成1∶5乳剂，置15 mL的离心管中反复冻融3次，3 000 r/min离心30 min，取病料上清液经0.22 μm微孔滤膜过滤，-70℃保存作为接种材料。

1.1.4 试剂 （1）DMEM培养基，Gibco12100-046，购自华美生物工程公司；（2）新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司产品；（3）青霉素160万单位，链霉素100万单位，山东鲁抗医药股份有限公司产品；（4）Taq DNA聚合酶（2.5 U/μL），4 dNTP 混合液（各 2.5 mmol/L），DL2 000 DNA Marker，天根生化科技（北京）有限公司产品；（5）胰酶，蛋白酶 K，EDTA，Tris液，SDS，琼脂糖，生工生物工程（上海）有限公司产品。……