杨芳莉，刁骋，韦星呈，曾艳，严丹丹

(沈阳医学院基础医学院免疫学教研室，辽宁 沈阳 110034)

白细胞介素10(interleutin－10，IL－10) 是由 T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核巨噬细胞和树突状细胞产生的一种细胞因子［1－2］。也有研究指出调节性T淋巴细胞 (Treg)才是体内IL－10的主要来源［3］。人类和小鼠的 IL－10 受体 (interleutin－10 receptor，IL－10R) 由 IL－10R1 和 IL－10R2 两个亚单位组成。IL－10R2 不与 IL－10 发生结合，IL－10R1是IL－10R中与IL－10结合的亚单位，人类T淋巴细胞表面表达较高水平IL－10R1［4］，活化后的T细胞IL－10R1表达水平有所下调［5］。与人类不同的是，小鼠静息 T淋巴细胞表面不表达 IL－10R1［6］。国外有报道指出小鼠CD8+T淋巴细胞接受抗原刺激后IL－10R1在细胞表面可有短暂的表达［7］，但关于CD4+T淋巴细胞相关方面的报道较少。本实验对抗原刺激后小鼠 CD4+T淋巴细胞表面 IL－10R1表达情况进行检测，为进一步研究IL－10相关免疫疾病的发病及进展提供有力支持。

1材料与方法

1.1 材料 试剂：小鼠 anti－CD4－FITC标记荧光抗和 anti－IL－10R1－PE 标记荧光抗体均购自 Biolegend公司;anti－CD28 和 anti－CD3 抗体购自北京博奥森生物技术有限公司公司;RPMI－1640培养基和小牛血清购自GIBCO GRL公司;尼龙毛购自日本和光纯药工业株式会社 (WOKA)。实验动物：SPF级6～8周龄 C57BL/6小鼠 (雌性)10只购于北京大学医学部实验动物中心。

1.2 方法

1.2.1 小鼠脾细胞悬液的制备 处死小鼠，无菌条件下分离脾脏，注射器冲洗脾脏，无菌冷红细胞裂解液处理后，洗涤细胞。加入适量PBS，充分混匀细胞，调整细胞浓度至1×107cell/ml。

1.2.2 尼龙毛去除B细胞 称取尼龙毛100 mg，充分填塞于5 ml注射器针筒内，用适量PBS平衡。将脾细胞悬液缓慢经过尼龙毛，过滤两次，将所得细胞重新调整浓度至1×106cell/ml。

1.2.3 流式细胞术无……