张丽勍, 许景升, 徐 进, 冯 洁

(中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京 100193)

植物青枯菌Ⅵ型分泌系统核心基因vasK突变株的构建及其致病性的测定

张丽勍, 许景升, 徐 进, 冯 洁*

(中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京 100193)

[目的]通过测试vasK基因突变株对番茄的致病力变化,评价该基因在青枯菌致病过程中的作用。[方法]根据青枯菌(Ralstonia solanacearum)中存在的Ⅵ型分泌系统基因簇中的核心基因vasK序列设计PCR引物,扩增并克隆vasK基因,将庆大霉素抗性基因(Gm)插入vasK基因内部,克隆至自杀质粒pK18mobsacB中,获得重组自杀质粒pK18-vasK-Gm。将自杀质粒电转化至青枯菌GMI1000感受态细胞中,采用同源重组双交换法,将野生型vasK基因置换。对vasK基因突变菌株进行三步筛选和PCR扩增鉴定。[结果]筛选获得了具有庆大霉素抗性的目标基因被抗性基因替换的青枯菌突变株(GMI1000-m)。土壤接种番茄青枯菌结果显示,突变株GMI1000-m的致病性较野生型GMI1000明显下降。[结论]vasK基因在青枯菌致病过程中具有重要作用。

青枯菌;Ⅵ型分泌系统;vasK基因

病原细菌通常利用蛋白的分泌来介导与寄主植物的相互作用[1]。革兰氏阴性病原细菌能够通过微小的装置将蛋白运送到胞外,或直接运输到寄主细胞中。这些微小的装置称为分泌系统。目前为止,发现在革兰氏阴性病原菌中至少存在着6种不同类型的分泌系统(Ⅰ～Ⅵ型分泌系统),这些分泌系统通过分泌或注射的方式释放胞外蛋白或效应子,以刺激或干扰寄主细胞的进程,从而能够调控一系列的病原细菌—寄主细胞的相互作用。……