魏 欢， 李 玲， 战丽萍， 张 波， 赵 嘉， 裴 中， 黄如训

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(peroxisome proliferators activated receptor-γ coactivator-1α，PGC-1α)是近年来备受关注的转录调控辅助激活因子。其促进线粒体增殖［1］、抗氧化［2］、促进血管内皮细胞增生［3］的作用为缺血性疾病的血管保护提供了新的药物治疗靶点。本次研究旨在探讨国家I类新药丁基苯酞(dl-3-n-butylphthalide，NBP)在糖氧剥夺 (Oxygen Glucose Deprivation，OGD)模型中，对PGC-1α这种内源性保护因子表达的影响及其可能机制;以寻找 NBP促进血管增生［4］、保护线粒体［5］的具体机制及其关键治疗靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞与分组 大鼠主动脉内皮细胞(SV40-transformed aortic rat endothelial cell line，SVAREC)，购自上海博迈公司。随机分为对照组(Control)、单纯糖氧剥夺组(OGD)、丁基苯酞预处理+糖氧剥夺组(NBP+OGD)、丁基苯酞预处理+糖氧剥夺+特异性eNOS抑制剂组(NBP+OGD+LNIO)。

1.1.2 主要试剂与仪器 99.9%丁苯酞原液由石家庄制药集团有限公司馈赠。兔抗大鼠PGC-1α单克隆抗体(Cell Signaling);小鼠抗大鼠β-actin单克隆抗体(Multisciences Biotech Co，Ltd);山羊血清封闭液(博士德);FITC标记山羊抗兔IgG二抗(Santa Cruz Biotechnology);Anti-rabbit IgG-HRP Antibody(R＆D);N5-(1-Imino ethyl)-L-ornithine·HCL，L-NIO(BIOMOL);MTT粉末(广州博理生物科技公司);一氧化氮合成酶(NOS)测试盒(南京建成科技有限公司);倒置相差显微镜(日本Olympus公司);电泳仪、电转仪、凝胶成像分析系统 (美国BIO-RAD公司);全自动酶标仪(BIO-TEK);缺氧盒、气压仪(长沙长锦科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 内皮细胞培养 大鼠主动脉内皮细胞(SVAREC)种于25cm2培养瓶，置 37℃、5%CO2培养箱内静置培养。培养基为RPMI 1640+10%胎牛血清(FBS)。待细胞融合至80%左右，以1∶3的比例传代培养。

1.2.2 糖氧剥夺模型 待种植于培养皿中的细胞生长融合至80% ～90%时，吸出培养基，按不同分组分别加入预先配置好的不同浓度NBP或正常培养基，置于细胞培养箱中预处理1h。……