蔡家利，孙加燕，扈国达，王 亮，丁 森，刘 勇

(重庆理工大学药学与生物工程学院，重庆 400054)

单克隆抗体由于高特异性和高亲和性，在疾病的预防、诊断和治疗发面发挥着重要作用，是后基因组时代重要的生物学工具［1－2］。它是一种将PCR技术和噬菌体展示技术相结合，在噬菌体表面表达、分泌，经筛选后获得特异性抗体的技术。噬菌体展示技术由Smith［3］首次阐述，基本原理是将目的基因克隆到噬菌体的外壳蛋白基因组中，转染大肠杆菌，使目的基因与外壳蛋白以融合蛋白的形式表达，呈现在噬菌体表面，通过固相亲和筛选，富集到表达目的分子的噬菌体。噬菌体抗体库技术就是该技术的一项成功应用。第1例噬菌体抗体库由Mccafferty［4］等在1990年构建。该技术的出现开创了一条简捷的基因工程抗体生产路线，并在许多领域得到广泛应用，已显示出强大的生命力。

1 噬菌体抗体库概述

1.1 噬菌体抗体库的构建

用B淋巴细胞全套抗体可变区基因克隆并组装成的噬菌体变异群体称为噬菌体抗体库［5］。抗体库构建的一般过程:① 从可变区基因来源中分离RNA。②互补DNA第1条链的合成。③构建可变区基因的PCR和可变区基因文库。④ 进行载体和可变区基因文库的限制性消化和连接。⑤感染大肠杆菌并表达目的基因。⑥筛选抗体。

1.2 噬菌体抗体库技术载体

噬菌体文库所用的载体通常是丝状噬菌体和噬菌粒［6］。丝状噬菌体载体一般所用的是外壳蛋白g3p与g8p展示系统。但也有一些学者利用其他的外壳蛋白，例如 Gao［7］等利用 g9p展示scFv，经过第1轮筛选就得到了 4.5×109个不同的scFv抗体。……