张洋，柴剑波，李胜志，高彦宇，肖洪彬，李冀

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

本研究是在“病证结合”理论基础上，将消化性溃疡病与中医寒、热证相结合，创建实验性胃溃疡寒、热证型动物模型，通过对寒、热证型规律观察揭示胃溃疡寒、热证证候实质，探究寒、热性质不同的方剂对相应模型的作用机制及方证相应规律。

1 实验材料及药物制备

1.1 实验动物 清洁级Wistar大鼠，黑龙江中医药大学药物安全性评价中心(GLP)，合格证号SCXK(京)2007－0001。

1.2 实验用药

热因素:将辣椒粉溶入60%无水乙醇中，配制成8%干辣椒粉的乙醇混悬液。

寒因素:称取 6g NaOH，溶入 500ml双蒸水中(0.3mol/L)。冰水:冷冻保存，使用时提前取出溶化。

大黄黄连泻心汤、理中丸:按原方药量及比例制备。其中，大黄黄连泻心汤浓缩至每毫升含0.5g生药，理中丸浓缩至每毫升含1g生药的液体，冰箱存储备用。

1.3 实验试剂 甲醛(分析纯级，天津市博大化工有限公司);乙醚(分析纯级，上海化学试剂采购供应站);盐酸(上海化学试剂采购供应站);NaOH(天津市博大化工有限公司);冰乙酸(上海化学试剂采购供应站);COR检测试剂盒(美国RD公司)。

2 实验方法

2.1 分组 Wistar大鼠，体质量180～220g，雌雄各半，给予标准的大鼠食物和水，实验前大鼠在实验室内习服7天。消炎痛模型取140只大鼠按体质量随机分为6组:即空白对照组10只、单消组(消炎痛模型)10只、热消组(热因素+消炎痛注射)30只、寒消组(寒因素+消炎痛注射)30只、单热组(单纯热因素)30只、单寒组(单纯寒因素)30只。醋酸涂抹型取168只大鼠按体质量随机分为6组:即空白对照组12只、模醋组(醋酸涂抹)12只、热醋组(热因素+醋酸涂抹)36只、寒醋组(寒因素+醋酸涂抹)36只、热假组(热因素+假手术)36只、寒假组(寒因素+假手术)36只。

2.2 造模方法 参照本课题组前期成果［1－3］。

2.3 实验步骤

2.3.1 消炎痛型胃溃疡寒、热证模型的建立及寒、热方剂干预实验

将各组动物分别按上述胃寒、热证造模方法，进行寒、热因素灌胃，给予相应造模剂;单消组及空白对照组则给予等体积生理盐水，连续7天。寒、热因素造模后，将受试大鼠(除空白对照组、单消组)，在各自组别内再按体质量随机分成3组，每组10只，即:热消、热消大、热消理;寒消、寒消大、寒消理;单热、单热大、单热理;单寒、单寒大、单寒理。按组别，各给药组分别给予相应治疗方剂，大黄黄连泻心汤1.8g/Kg，理中丸3.6g/Kg，每天2次;其它组给予等体积生理盐水，连续4天;末次给药后将受试大鼠禁食不禁水30h(注意勿使动物食入粪便和垫料等杂物，以免影响造模结果)，进行腹腔注射消炎痛，并于消炎痛注射开始前30min，再给药1次。

2.3.2 醋酸涂抹型胃溃疡寒、热证模型的建立及寒、热方剂干预实验

将各组动物分别按上述胃寒、热证造模方法，进行寒、热因素灌胃，给予相应造模剂;模醋组及空白对照组则给予等体积生理盐水，连续7天。再将各组(除空白对照组、模醋组)大鼠在各自组别内再按体质量随机分成3组，每组12只:热醋、热醋大、热醋理;寒醋、寒醋大、寒醋理;热假、热假大、热假理;寒假、寒假大、寒假理。末次寒、热因素给药后30min，将相应组别分别行醋酸涂抹术及假手术，建立醋酸涂抹型胃溃疡寒、热证模型。术后24h，各给药组按组别分别给予相应受试方剂，大黄黄连泻心汤1.8g/kg，理中丸3.6g/Kg，2次/天;其他组给予等体积生理盐水，2次/天，连续灌服治疗药物11天。

2.4 实验取材 分别于消炎痛腹腔注射7h后，醋酸涂抹型末次给药24h后眼球取血，分离血清。

2.5 统计学处理

所有数据通过SPSS 13.0软件包用单因素方差分析(one－way ANOVA)LSD或S－N－K法进行两两比较检验，用(s)表示结果。

3 实验结果

3.1 寒、热方剂对消炎痛型胃溃疡寒、热证模型大鼠血清COR含量的影响 结果见表1，2，3。

表1 消炎痛型胃溃疡寒、热证模型间血清COR含量的变化(s)

表1 消炎痛型胃溃疡寒、热证模型间血清COR含量的变化(s)

注:与空白组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与热消组比较，△△P＜0.01;与单寒组比较，▲▲P ＜0.01。

组别 n COR(ng/ml)空白10 34.54 ±10.88模消 9 32.73 ±6.09△△寒消 9 28.35 ±9.59△△单寒 10 30.80 ±7.87热消 9 45.54 ±11.07*单热 9 49.04 ±10.05＊＊▲▲

由表1可知，热消、单热组与空白对照组比较血清COR的含量明显升高，具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。热消组与寒消组、模消组比较升高显著，具有显著性差异(P＜0.01)，单热组与单寒组比较血清COR的含量明显升高，具有显著性差异(P＜0.01)，说明热因素作用效果显著。提示COR可作为临床急性溃疡热证的微观指征。由表2、3可知，热消大治疗组、单热大治疗组与热消模型组、单热模型组比较血清COR的含量明显降低，具有显著性差异(P＜0.05)。

表2 寒、热方剂对消炎痛型胃溃疡寒证大鼠血清COR含量的影响(s)

表2 寒、热方剂对消炎痛型胃溃疡寒证大鼠血清COR含量的影响(s)

组别 n COR(ng/ml)寒消28.35 ±9.59寒消大 8 30.79 ±7.87寒消理 8 32.43 ±6.44单寒 10 30.80 ±7.87单寒大 9 36.21 ±7.44单寒理9 37.89 ±10.02 9

表3 寒、热方剂对消炎痛型胃溃疡热证大鼠血清COR含量的影响(s)

表3 寒、热方剂对消炎痛型胃溃疡热证大鼠血清COR含量的影响(s)

注:与单热组比较，★P＜0.05;与热消组比较，△P＜0.05。

组别 n COR(ng/ml)热消45.54 ±11.07热消大 8 35.56 ±6.23△热消理 8 50.00 ±9.36单热 9 49.04 ±10.05单热大 9 36.95 ±11.89★单热理9 9 55.09 ±16.94

3.2 寒、热方剂对醋酸涂抹型胃溃疡寒、热证模型大鼠血清COR含量的影响 结果见表4，5，6。

表4 醋酸涂抹型胃溃疡寒、热证模型间大鼠血清COR的含量变化(s)

表4 醋酸涂抹型胃溃疡寒、热证模型间大鼠血清COR的含量变化(s)

注:与空白组比较，＊＊P＜0.01;与热醋组比较，△P＜0.05;与寒假组比较，▲P＜0.05。

组别 n COR(ng/ml)空白10 33.00 ±8.69 12 29.43 ±7.46模醋 9 31.95 ±16.00寒醋 9 30.24 ±6.56△热醋 8 41.03 ±9.93＊＊单热假 10 43.92 ±8.38＊＊▲单寒假

由表4可知，热醋组、热假组大鼠血清COR的含量明显高于空白对照组，具有显著性差异(P＜0.01)。热醋组与寒醋组、热假组与寒假组比较血清COR的含量明显升高，具有显著性差异(P＜0.05)。

表5 寒、热方剂对醋酸涂抹型胃溃疡寒证大鼠血清COR含量的影响(s)

表5 寒、热方剂对醋酸涂抹型胃溃疡寒证大鼠血清COR含量的影响(s)

组别 n COR(ng/ml)寒醋30.24 ±6.56寒醋理 10 32.34 ±10.20寒醋大 9 34.78 ±8.83单寒假 10 33.00 ±8.69寒假理 10 31.29 ±10.06寒假大9 10 36.84 ±10.06

表6 寒、热方剂对醋酸涂抹型胃溃疡热证大鼠血清COR含量的影响(s)

表6 寒、热方剂对醋酸涂抹型胃溃疡热证大鼠血清COR含量的影响(s)

注:与热醋组比较，△P＜0.05;与热假组比较，★P＜0.05。

组别 n COR(ng/ml)41.03 ±9.93热醋理 8 43.98 ±13.19热醋大 8 31.31 ±5.39△单热假 10 43.92 ±8.38热假理 10 45.20 ±13.37热假大 10 33.30 ±9.76热醋8★

由表5、6可知，热醋大组、热假大组与热醋、热假组比较血清COR的含量明显降低，具有显著性差异(P ＜0.05)。

4 讨论

皮质醇是肾上腺皮质合成的一种主要激素，对人体糖、脂肪和蛋白质的代谢有重要的影响，主要作用是促进蛋白质的分解，抑制其合成。在应激反应中，肾上腺被认为是一个关键性的器官［4］，机体受到刺激时，肾上腺皮质功能增强，分泌出大量的皮质醇(COR)，可提高机体的抵抗能力，是机体的一种保护性机制。然而，过强的刺激又会出现负面的并发症，最常见的是溃疡的发生。

本研究发现，血清COR的含量在溃疡热证上升明显，热因素对本研究建立的消炎痛型、醋酸涂抹型胃溃疡寒、热证“病证结合”模型的损伤有明显影响，可以加重溃疡，说明COR在热证中发挥了损伤作用，可作为临床溃疡热证的微观指征。其作用机制可能为热证造模后中枢神经系统通过激活垂体－肾上腺轴导致皮质激素分泌增加，破坏胃黏膜保护屏障，从而加速溃疡的发生。经寒性方剂大黄黄连泻心汤治疗后，热性模型组大鼠血清COR的含量明显降低，对单纯寒因素、寒因素结合实验性胃溃疡模型血清COR的含量无影响。寒性方剂大黄黄连泻心汤预防消炎痛型胃溃疡热证，治疗醋酸涂抹型胃溃疡热证的作用机制可能与抑制皮质醇分泌有关。热性方剂理中丸对寒证模型COR的含量影响不大，寒性方剂大黄黄连泻心汤对寒证模型亦无影响，说明在溃疡病的病理状态下，寒性方剂通过“方证相应”降低热证模型大鼠血清COR的含量而达到预防溃疡或促进溃疡愈合的目的。

［1］毕珺辉，李冀，谢田，等.大黄黄连泻心汤、理中丸对四种模型胃溃疡寒热证大鼠血清 PAF含量的影响［J］.中医药学报，2011，39(2):51－55.

［2］李冀，谢田，柴剑波，等.大黄黄连泻心汤、理中丸对幽门结扎型、醋酸涂抹型胃溃疡寒热证模型大鼠血清NT含量的影响［J］.中医药学报，2011，39(1):38 －41.

［3］李冀，柴剑波，毕珺辉，等.大黄黄连泻心汤、理中丸对胃寒证、胃热证模型大鼠基础代谢的影响［J］.中医药学报，2010，38(5):55－57.

［4］冯新为.病理生理学［M］.北京:人民卫生出版社，1991:170.