聂晓静，赵筱萍，王 毅

(1.浙江大学药学院，浙江 杭州310058;2.浙江中医药大学，浙江杭州310053)

随着天然产物大规模分离制备技术与高通量筛选技术的迅猛发展［1］，天然产物已成为抗肿瘤药物筛选的重要来源之一［2］。常用的抗肿瘤活性体外筛选方法主要包括 3-(4，5-Dimethylthiazol-2-yl)-2，5-di-phenyltetrazolium bromide(MTT)法和Sulforhodamine B(SRB)法等，在实际应用中已取得了较大的成效［3］。但由于受到实验操作和检测方法的限制，难以满足迅速发展的新药研发对药物高通量筛选(HTS)的要求。因此，建立合理、高效、简便的抗肿瘤药物筛选新方法，对于抗肿瘤新药研发具有重要意义。

荧光标记技术因其具有简便、灵敏、稳定等特点［4］，在生物医药领域得到了广泛应用，并已成为高通量筛选的关键技术之一。二乙酸荧光素(FDA)是一种常用荧光染料，能穿越细胞质膜后在胞内被酯酶水解，因为其水解产物不能自由通过质膜且能够发出荧光，因此，可用于活细胞标记并测定细胞活力［5］。本研究发展了一种基于FDA标记活细胞的抗肿瘤活性物质快速筛选方法，并运用该方法对中药乌药中抗肿瘤活性组分进行了初步筛选，为从复杂中药组分中快速发现抗肿瘤活性物质提供了新途径。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 细胞荧光显微图像获取平台由浙江大学药物信息学研究所开发，包括Leica DMI 6000 B(德国莱卡公司)倒置荧光显微镜、高精度可控电动平台、电荷耦合器(CCD)摄像头(Leica DFC 310 FX)和荧光图像拼接及识别软件，其基本原理与文献［6］类似。HP1100液相色谱系统，含二元梯度泵、自动进样器、柱温箱和DAD检测器。……