毛小荣，岳 伟，袁 宏，陈 红，薛 苗

(兰州大学第一医院传染科，甘肃兰州730000)

HSC(hepatic stellate cell，HSC)的活化、转化及增殖是肝纤维化发生发展中的中心环节，已经有大量研究显示，TGF-β和CTGF因子是介导HSC活化的关键细胞因子，所以是否能抑制是RNAi治疗肝纤维化的关键，且是较理想的靶位，尤其以 CTGF因子为最佳［1-2］。CTGF是近几年来发现的一种重要的致器官组织纤维化的细胞因子，它不但可以特异性的介导TGF-β的促纤维化效应，而且也不影响其抑制细胞的增殖和免疫反应的作用，还可以介导由机械应力、肾素-血管紧张素及肿瘤坏死因子-α等诱导的肝纤维化［3-4］。本研究旨在设计合成三段RNA干扰候选片段，并筛选出高效的干扰片段，运用RNA干扰技术，探讨其通过尾静脉注射是否具有抗大鼠肝纤维化作用，为今后寻找更有效的抗肝纤维化治疗方法提供新策略。

1 材料和方法

1.1 实验材料 人胎肝细胞株(L-02)来源于本实验室冻存细胞，设计好的脱氧核苷酸序列由上海吉玛公司合成，脂质体2000(Lipofectamine 2000)为美国Invitrogen公司产品，Opti-MEM培养基(Opti-MEM I Reduced Serum Medium)为美国Invitrogen公司产品，ECL试剂盒为美国Pierce公司产品，兔抗人 CTGF抗体为美国PEPRO TECH公司产品，小鼠β-actin单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗及羊抗小鼠二抗购于武汉博士德生物有限公司。SD大鼠由甘肃省中医学院SPF级动物实验中心提供。Trizol及两步法 RT-PCR试剂盒为Takara公司产品，肝纤维化指标放免试剂盒购自北京北方生物制品研究所，CTGF及β-actin引物由Takara公司设计及合成，CCl4为长江化工厂产品，其它为分析纯试剂。

1.2 实验方法……