邢小康，何继亮，陈 智

(1.浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室，浙江杭州310003;2.浙江大学医学院环境医学系，浙江杭州310058)

丙型病毒性肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)感染导致的全球传染性疾病，也是导致肝硬化和肝癌的主要原因之一。目前，聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗是丙型肝炎的标准治疗方案，但这种抗病毒疗法仅仅对部分患者有较好疗效，并且存在使用禁忌、个体差异和药物副作用等问题。因此，亟待开发新的安全有效的替代疗法。

RNA干扰是近些年来用于各种疾病干预的新的基因治疗方法。在抗HCV方面，RNA干扰虽尚未应用于临床，但在实验室研究中已经取得了一定的进展［1-3］，研究主要集中在含有HCV全长或亚基因组复制子的稳定转染模型中进行，而对于在HCV病毒颗粒感染的细胞中能否有效抑制HCV复制未见报道。本研究通过构建HCV感染细胞模型，研究靶向 HCV NS5B基因的siRNA能否有效抑制HCV复制，通过检测siRNA对细胞内PKR基因的激活作用，进一步探讨病毒抑制是否通过PKR介导的固有免疫途径。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株及质粒 HCV全长基因组质粒pFL-JC1由美国Apath公司惠赠，Huh7.5.1细胞源自美国斯克利普斯研究所Scott Forrest教授，由上海巴斯德研究所钟劲教授提供。

1.1.2 主要试剂 DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、Opti-MEM培养基购自GIBCO公司;脂质体Lipofectamine 2000和总RNA提取试剂Trizol Reagent购自Invitrogen公司;T7体外转录试剂盒购自 Promega公司;限制性内切酶XbaⅠ、绿豆核酸酶、蛋白酶K购自NEB公司;RNA纯化试剂盒购自Qiagen公司;HCV核心蛋白单克隆抗体……