孙志强

（常州市第二人民医院放疗科，江苏 常州 213000）

脑胶质瘤属胶质细胞源性的良、恶性中枢神经系统肿瘤，其中恶性胶质母细胞瘤是成人原发性脑肿瘤中最普遍的亚型[1]，因为大多数胶质瘤呈浸润性生长且与周围脑组织边界不清，所以治疗十分困难。放射治疗是最有效的辅助治疗，但胶质瘤为中等放射敏感度，如何增加肿瘤组织的辐射敏感性，减轻正常组织损伤，以提高治疗效果，是我们的目的所在。环氧化酶2（Cyclooxygenase，COX-2）在许多恶性肿瘤中呈高表达，与局部浸润、远处转移及预后等关系密切[2]。许多研究发现COX-2抑制剂在体外和动物实验中均有抗肿瘤与放射增敏作用，但其具体作用机制目前尚不清楚[3-5]。本实验通过克隆法、反转录聚合酶链反应（Reverse transcriptase PCR，RT-PCR）法检测60Co-γ射线照射两种胶质瘤细胞SHG44与U87-MG克隆存活率及COX-2 mRNA表达水平的关系，探讨胶质瘤细胞辐射敏感性差异的可能机制，为寻求增强放射敏感性药物提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 材料

脑胶质瘤细胞SHG44及细胞U87-MG，由苏州大学肿瘤放射生物研究室提供；RPMI 1640培养基（Gibco）；胎牛血清购（四季青）；RNeasy Mini Kit，QIAshredder Homogenizers（QIAGEN）；Rtase M-MLV/RTase Hˉ，Random primers（Takara）；COX-2引物、18S rRNA引物（生工）。

1.2 方法

1.2.1 辐照条件

60Co-γ射线（剂量率1Gy/min，源距2.8m）辐照。

1.2.2 克隆法检测细胞存活率

以对数生长期细胞制备单细胞悬液，接种24h后细胞贴壁，给予不同剂量60Co-γ射线照射，照射后胰酶消化制备单细胞悬液，以500个细胞/皿接种至60mm培养皿，培养11～12d后甲醇固定、Gimsa染色后，显微镜下计数50个细胞以上的细胞集落。每组每个剂量点设三个平行样。计算各种实验条件下的克隆形成率。……