人CCL21基因克隆及其序列分析
2011-08-04刘长王莹
刘长王莹 崔 凯 李 胜*
(1 临沂大学商学院,山东 临沂 276000;2 山东省肿瘤防治研究院,山东 济南 250117)
次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid tissue chemokine,SLC)属于CC亚族趋化因子,即CCL21,是由Nagria[1]在人基因表达序列标签(expressed sequence tag,EST)数据库中克隆出的趋化因子,CCL21的基因定位于9p13,其cDNA序列包括847个碱基,由4个外显子和3个内含子组成,其分子量约为14KD,由134个氨基酸残基组成,其中23个氨基酸残基为信号肽序列,111个氨基酸的成熟肽含有4个半胱氨酸残基,与其他人类CC型趋化因子有21%~33%的同源性,但有其独特的约30个氨基酸组成的羧基末端延伸,该延伸内包含2个半胱氨酸残基。CCL21主要存在于外周次级淋巴组织,如脾、淋巴结等部位,它具有较强的趋化作用,特别是对树突状细胞,T细胞与自然杀伤细胞,能使其聚集到外周淋巴组织或器官,而外周淋巴组织是免疫应答发生的初始部位。Campebell等[2]研究证实:在流动状态下CCL21能诱导循环T细胞快速粘附到高内皮小静脉(high endothelial venules,HEV)上,参与淋巴细胞和树突状细胞(dendritic cell,DCs)的归巢和迁移。CCR7是CCL21的高亲合力受体,CCL21具有种属特异性,人CCL21只与CCR7相结合,而小鼠CCL21不仅与CCR7也与CXCR3结合[3]。为进一步探索CCL21在肿瘤基因治疗中的应用,本实验中我们成功克隆了人CCL21基因并进行了序列分析。
1 材料与方法
1.1 淋巴结组织及质粒、菌种
胃癌患者手术清扫下来的新鲜淋巴结组织取自山东大学附属齐鲁医院,经患者家属同意后收集进行实验;pEASY-T1 simple cloning kit购自北京全式金生物技术有限公司;Trans109化学感受态细胞购自北京全式金生物技术有限公司。
1.2 主要仪器和设备
YJ-1450D 型医用净化工作台;……
