韦碧柳，李国平，蒲泽锦，黄官友，冯家琳，叶艳清，吴灵飞

(汕头大学医学院第二附属医院1.消化内科，2.妇产科，3.信息科，广东 汕头 515041)

腺苷是人体内重要的生物信号分子，正常情况下维持在极低浓度水平，通过不同的腺苷受体发挥生理调节功能［1］。然而，体外高浓度腺苷却可通过线粒体途径［2］或其死亡受体途径［3］等不同机制诱导多种肿瘤细胞凋亡。已有研究表明，腺苷可诱导人肝癌HepG2细胞凋亡［4］，其机制可能与内质网应激途径有关［5］。虽然食管癌 EC109细胞和肝癌HepG2细胞均属于上皮类型细胞，但两种细胞来源于不同的上皮，腺苷是否亦可通过此途径诱导食管癌细胞凋亡目前尚未见报道。本文旨在观察腺苷对人食管癌EC109细胞凋亡的作用，并探讨其与内质网应激途径相关的分子机制。

1 材料与方法

1.1 药物、试剂和仪器

腺苷购自美国Amerco公司。DMEM培养基购自美国Gibco公司;胎牛血清购自美国Clark Bio公司;山羊抗人葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78，GRP78)抗体、小鼠抗人胱天蛋白酶4抗体、兔抗人转录因子CHOP抗体、兔抗人胱天蛋白酶3抗体和小鼠抗人β肌动蛋白抗体均购自Santa Cruz公司;蛋白酶抑制剂 PMSF、裂解液、4'，6-二脒基-2-苯基吲哚(4'，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)和碘化丙啶(propidium iodide，PI)、生物素标记的山羊抗兔IgG抗体(二抗)和生物素标记的山羊抗小鼠IgG抗体(二抗)均购自Sigma公司;Alexa Flour标记的羊抗兔 IgG抗体(荧光标记二抗)购自Invitrogen公司;亲和素生物素辣根过氧化物复合物(avidin biotin horseradish peroxidase complex，ABC)试剂盒购自美国Vector Laboratories公司;ECL化学发光试剂盒购自Pierce公司;TUNEL试剂盒购自Promega公司;硝酸纤维素膜购自Millipore公司。荧光显微镜BX51(日本Olympus公……