何文涓，张兰芳，袁志坚，何晓升

(1.无锡卫生高等职业技术学校，江苏 无锡 214028;2.杭州师范大学 临床医学院，浙江 杭州 310036)

黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides，APS)为中 药黄芪的提取物，有研究发现，一定浓度的APS在体外能促进人骨髓细胞中红细胞系和粒细胞系祖细胞的生成，这种促进作用在造血因子存在时，发挥的作用最大［1］。也有研究发现，短期低浓度APS能促进诱导培养的骨髓基质干细胞的代谢和蛋白质的合成，有利于细胞的增殖和向成骨分化［2］。

骨髓干细胞量不多，取材也不便。最近一些研究表明人体脂肪、胎盘等组织中的干细胞，具有惊人的可塑性，和胚胎干细胞一样，可以分化成各种各样的组织细胞。且脂肪来源的间充质干细胞(ASCs)贮藏量丰富，取材方便，因此对ASCs的研究具有极大的实用价值。本研究对兔ASCs进行培养，并观察APS对兔ASCs体外增殖的作用。

1 材料

APS注射液(批号:20090811)，成都新亨药业有限公司;四甲基偶氮唑盐(MTT)、碘化丙啶(PI)，美国 Sigma公司;抗体 CD14，美国 Caltag公司;CD29、CD44，美国 Chemcon 公司;CD45，美国 Antigenix公司;DMEM培养基、胎牛血清，美国Gibo公司。

3350型自动酶联免疫检测仪，美国Beckman公司;流式细胞仪，美国BD公司。

家兔，雌雄不拘，体重约1 kg，清洁级，杭州师范大学动物室提供。

2 方法

2.1 ASCs的来源和培养

家兔在利多卡因局部麻醉下，取出两侧腹沟处的脂肪组织，剪成颗粒状，匀浆，用0.075%胶原酶Ⅰ消化，过300目筛网，4℃，1 200 r/min离心5 min，弃去上层脂肪和上清液，再用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤沉淀组织3次，用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基稀释，离心后取出沉淀组织。

将沉淀组织接种于培养瓶内，置37℃、5%CO2，饱和湿度恒温培养箱中培养24 h，之后倒去原培养液，PBS洗两次以去除未贴壁残渣。……