周丽侠 张智涛

摘要在CTAB法的基础上，分别用LiCl、异丙醇、NaAc和无水乙醇、LiCl和异丙醇对花生种子总RNA进行沉淀。结果表明：LiCl过夜沉淀的花生种子总RNA纯度、完整性和产率均较高，效果最好。

关键词花生种子；总RNA提取；CTAB法；RNA沉淀

中图分类号S565.2文献标识码A文章编号 1007-5739（2010）24-0029-02

不同的植物组织及在不同生理状态下的植物材料，其细胞与组织的成分各不相同。用实验室改进的CTAB法[1]，提取花生根、茎、叶的RNA比较容易，但由于花生种子中含大量的蛋白、多糖、酚类等成分，增加了RNA提取的难度。该试验针对花生种子的特点，在改良的CTAB法的基础上，分别用LiCl、异丙醇、NaAc和无水乙醇、LiCl和异丙醇对RNA进行沉淀，并将不同沉淀方法获得的花生种子总RNA效果进行比较。

1材料与方法

1.1试验材料

鲁花14花生种子，由山东省花生研究所提供。

1.2试验方法

1.2.1改进的CTAB法。①称取0.2 g新鲜组织或-70 ℃保存的样品，在液氮中充分研磨成粉末状，研磨中不断缓慢加入液氮，防止材料解冻。②将研好的组织迅速转移至预热（65 ℃）的含有600 μL CTAB提取液的EP管中，立即剧烈涡旋振荡30 s，使其混匀。③65 ℃水浴剧烈涡旋振荡3～5次,振荡时间2～5 min。④稍微冷却后将等体积的氯仿∶异戊醇按24∶1的比例加入水浴中，涡旋振荡1 min，混匀，4 ℃、12 000 r/m离心15 min。⑤将上清液转移到另一新的EP管中，加入2 μL的DNaseⅠ，37 ℃水浴15 min。⑥再加入等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1）涡旋振荡1 min，混匀，4 ℃、12 000 r/m离心15 min。⑦将上清转移到另一新的EP管中，加入1/3体积8 mol/L LiCl，使其终浓度为2 mol/L，4 ℃过液沉淀。⑧4 ℃、12 000 r/m离心20 min，弃上清。⑨分别用70%乙醇、无水乙醇洗沉淀，晾干，加30～50 μL DEPC-H2O溶解沉淀。

1.2.2总RNA的提取。在实验室改进的CTAB法的基础上作以下改良：一是将步骤④中等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1）改为水饱和酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1）。……