王莲莲，罗娜，曹霞

(中国医科大学附属第四医院产科，辽宁沈阳 110032)

妊娠期高血压疾病是妊娠所特有的疾病，子痫前期是其一种发展阶段，其病因不明，至今仍是围产医学研究的重点。近年来其免疫病因学的研究成为热点，目前认为，母胎免疫耐受失衡是子痫前期发病的中心环节之一。其中Th1/Th2失衡现象已得到证实，但Th1/Th2失衡原因仍是不解之谜。因协同刺激分子白细胞分化抗原28(CD28)/细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA-4)是T细胞活化的重要调节因子［1］，也影响T淋巴细胞的增殖。本研究拟通过检测外周血淋巴细胞中CD28/CTLA-4的表达，探讨其在子痫前期发病机制中的作用。

1 对象与方法

1.1 检测对象

为中国医科大学附属第四医院产科2009年10月至2010年11月产科病房住院患者，共65例。35例子痫前期患者年龄(31.35 ±2.20)岁，孕(35.80 ±1.60)周，平均血压(150.5 ±15.5)/(96.5 ±4.5)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa);30例正常晚期妊娠孕妇年龄(30.20 ±2.50)岁，孕(37.50 ± 2.60)周，平均血压(120.5 ±8.2)/(70.5 ±10.5)mmHg。诊断标准具体参照文献［2］，且所有对象均为剖宫产，均无高血压、糖尿病、甲亢等病史，无其他妊娠合并症，无传染病病史。两组间年龄、孕周差异均无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂及仪器 FITC标记的抗人CD28单克隆抗体、PE标记的抗人CTLA-4单克隆抗体及PE标记的抗人CD3单克隆抗体为美国Biolegend公司产品;人淋巴细胞分离液购自中国医学科学院。主要仪器:FACSCalibur流式细胞仪;离心机。

1.2.2 血液标本的采集及制备方法 采集各组孕妇空腹肘正中静脉血1 ml，肝素抗凝，分离淋巴细胞后，调整细胞浓度为1×106ml－1。取100 μl加入 CD3荧光抗体20 μl，4 ℃ 避光静置 30 min，加细胞染色液2 ml洗涤，离心 5 min，弃上清，加固定/透膜剂 1 ml，4℃避光静置30 min，加破膜剂2 ml，离心5 min，弃上清;加抗人CD28，上机分析;加抗人CTLA-4单克隆抗体，上机分析。……