莱菔硫烷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的JNK途径
2011-06-08曲中原季宇彬
邹 翔,曲中原,白 晶,季宇彬,
(1.哈尔滨商业大学 生命科学与环境科学研究中心,哈尔滨 150076;2.国家教育部 抗肿瘤天然药物工程研究中心,哈尔滨 150076;3.哈尔滨商业大学中药学博士后流动站,哈尔滨 150076)
西兰花(Broccoli)卓越的防癌抗癌作用归因于其富含异硫氰酸盐类物质,而莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)是其中最主要的活性成分之一[1-5].以往研究表明,SFN可通过完全抑制I相酶,并且诱导II相解毒酶的表达而预防化学物诱发的肝癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、直肠癌等多种癌症的发生[6-7].近年来研究发现,SFN 可通过诱导 HepG-2细胞发生G2/M期阻滞,并通过启动线粒体途径诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡,发挥抗肝癌作用[8-9].本文主要在考察 SFN 诱导 HepG-2细胞凋亡作用的基础上,研究SFN对人肝癌HepG-2细胞中JNK和p-JNK蛋白表达的影响,探讨JNK信号转导途径在SFN诱导HepG-2细胞凋亡中的作用.
1 材料与方法
1.1 细胞
人肝癌HepG-2细胞株,由哈尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站传代保种.
1.2 药品和试剂
莱菔硫烷(分子式C6H11NOS2,相对分子质量为 177.3,纯度98.3%),美国 Alexis公司,用前以二甲基亚砜(DMSO)溶解,-20℃保存,临用时加培养液稀释至所需浓度,使DMSO终质量分数不超过0.1%;阿霉素(批号080907),浙江海正药业股份有限公司;RPMI-1640培养基干粉,美国GIBCO公司;胰蛋白酶、二甲基亚砜(DMSO),美国Sigma公司;Hoechst 33258:Sigma公司;鼠抗JNK/SAPK抗体、鼠抗p-JNK/SAPK抗体、碱磷酶标记马抗鼠IgG,碧云天公司;其他试剂均为国产分析纯.
1.3 实验仪器
CO2培养箱,日本Sanyo公司;低温高速离心机,美国Beckman-Coulter公司;荧光显微镜:日本Olympus公司;水平电泳仪、电转仪,美国Bio-Rad公司;超净工作台,苏净集团.