高世勇，刘 溪，季宇彬

(1.哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，哈尔滨 150076;2.国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，哈尔滨 150076)

《本经》、《本草纲目》等中药专著中记载，吴茱萸主温中下气，止痛，咳逆寒热，除湿，血痹，逐风邪，开腠理，治吞酸，厥阴痰涎头痛，阴毒腹痛，疝气血痢［1］.吴茱萸碱是色胺吲哚类生物碱，是吴茱萸主要的生物碱类化合物，其分子式为C19H17N3O，分子质量为303.36，结构式如图1.吴茱萸碱的药理作用在近些年越来越受到关注.国内外研究表明吴茱萸碱对于心脏［2－3］、内分泌系统［4－5］、支气管平滑肌［6］及胃肠道［7］等均具有较强药理作用，并且具有抗炎镇痛［8］、减肥的作用［9］，还能够增强机体免疫力［10－11］等.体内、体外抗肿瘤实验可知，吴茱萸碱对 HeLa人宫颈癌［12］、A375－S2人黑色素瘤［13－14］、MCF7 人乳腺癌［15］、NCI/ADR－RES 人耐药乳腺癌［16］等多种肿瘤细胞株均有细胞毒作用;而吴茱萸碱对人肝癌HepG-2细胞作用的报道很少，其对HepG-2细胞周期影响及机制的研究未见报道.本实验研究吴茱萸碱对HepG-2细胞周期的阻滞作用，并且确定其对HepG-2细胞内微管蛋白聚集形态的影响.

1 实验材料与仪器

1.1 实验材料

1.1.1 细胞株

人肝癌HepG-2细胞是由黑龙江省肿瘤医院肿瘤药物研究所提供.

1.1.2 实验试剂

吴茱萸碱(Evodiamine)药物纯度大于98%、胰蛋白酶、碘化丙锭 (PI)、二甲基亚砜(DMSO)购自于Sigma药物公司;羟基喜树碱(HCPT)购自于上海龙翔生物医药公司;RPMI1640培养基购自于GIBCO公司;Tubulin抗体、FITC标记山羊抗小鼠IgG(H+L)购自于碧云天生物技术研究所;胎牛血清购自于杭州四季青生物工程公司;MTT粉末(噻唑……