陈咏梅 邹世海 陈咏梅 彭 鑫 朱赛香

（深圳市宝安区人民医院血液透析室，广东 深圳 518101）

肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进展至终末期肾功能衰竭的共同病理过程，其严重程度跟很多慢性肾病的预后密切相关。肾小管上皮-间充质转化（EMT）是肾间质纤维化的主要机制之一[1-3]，大量肌成纤维细胞的生成和肌成纤维细胞标志性蛋白之一α-SMA的表达显著增加。晚期氧化蛋白产物（AOPP）是近年来引起重视的一类与炎症、氧化应激密切相关的氧化修饰蛋白。尿毒症时，肾小管上皮细胞经常面临多种毒素的损伤。多种尿毒毒素可激活肾小管上皮细胞。已有研究表明，除大量白蛋白外，多种修饰后蛋白，如：低密度脂蛋白、氧化低密度脂蛋白、晚期糖基化终产物等，均可激活肾小管上皮细胞出现不同程度的表型转分化[4]。本研究通过免疫组化观察AOPP是否会影响α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）等标志物的水平，旨在研究AOPP是否可诱导肾小管上皮细胞活化，转分化，以及参与肾间质炎证、纤维化的过程机制。

1 材料与方法

1.1 试剂与材料

人血清白蛋白（HAS）购自上海新兴，次氯酸购自上海试剂一厂，α-SMA及E-cadherin抗体购自武汉博士德公司，山羊血清、二抗、DAB等试剂购自北京中山公司，FBS，DMEM购自Hyclone公司。

1.2 AOPP-BSA的制备

按文献报道[2]方法，将60mg/mLHAS（PBS稀释）与次氯酸溶液等体积混合，室温搅拌反应1h（25～30℃），制备出BSA与次氯酸摩尔比为1∶140的AOPP。制备的AOPP-HAS加入β-巯基乙醇终止反应。将反应产物轩于超滤管中1000g离心超滤30min，加入适量PBS冲洗，再次离心超滤。……