夏广清，韩晓娟

(1.通化师范学院 生物系，吉林 通化 134002；2.东北师范大学，吉林 长春 130000)

黄芪抗衰老作用的研究以体内实验和血清药理学方法为常见[1-2].黄芪多糖(astragalin polyose APS)为黄芪的主要成分，大量药理及临床实验结果表明，APS具有抗衰老活性[3].本实验以斑马鱼为实验材料，观察了黄芪多糖不同浓度对其细胞分化及与细胞信号转导通路关键基因表达的影响，为黄芪多糖抗衰老提供理论依据.

1 材料与方法

材料：野生型斑马鱼由中国海洋大学生命科学院提供，在处理的前一天，将雌雄斑马鱼雌雄进行分离，并与第二天上午进行交配后收集鱼卵，并在28℃条件下培养，取孵育8小时发育正常的斑马鱼幼胚置于24微孔板中，每一微孔板15只斑马鱼幼胚，设置三次重复，每一处理分别设置空白对照组、黄芪多糖低(0.125mg/ml)、中(0.25mg/ml)、高(0.5mg/ml)浓度进行处理，每一天更换一次培养液，连续处理三天，搜集样品，进行染色及基因表达分析.

药物及试剂:黄芪多糖纯样品购自陕西昂盛生物医药科技有限公司，β-半乳糖苷酶及吖啶购自Sigma公司.将10mg黄芪多糖溶于1ml孵育鱼卵用的水溶液中(egg water)，制成10mg/ml储存液，4℃保存.

样品的采集与处理:取孵育8个小时发育正常的斑马鱼进行药物处理，每一处理浓度30个样品，三次重复，连续处理三天，光学显微镜下观察鱼的生长发育状态.

样品的SA-β-gal染色分析:取连续处理三天发育正常的斑马鱼样品，PBS洗3～5次，4%paraformal-dehyde(PFA)4℃固定1～3天；PBS洗3～4次后PBS保存1～3天；然后PBS洗1次，加入染色液(25ul/ml)37℃培养16～24小时观察照相.

样品AO染色分析：取处……