邵庆勇，杨红远，牛自兵，李卫娟，朱 兰，吕春荣，洪琼花

（1.云南省畜牧兽医科学院，昆明 650224；2.云南省芒市畜牧兽医局）

卵母细胞的有效冷冻保存不仅可以储备哺乳动物遗传资源，而且在家畜胚胎移植产业化技术体系中起着重要作用，动物卵母细胞是母系遗传信息的载体，卵母细胞的长期冷冻保存，在品种资源保护和改良、资源共享与交换、濒危动物的挽救、核移植、转基因动物研制等方面都具有独特的优势和应用价值。卵母细胞的冷冻保存，对探讨其低温生物学特性和体外受精机理的研究有重要意义。牛卵母细胞的冷冻保存，国外开展了不少研究，并获得了可喜的进展，Vajta等于1998年获得了来自冷冻牛体外成熟卵母细胞的牛犊［1］，到2002年，Vieira等又获得了来自冷冻未成熟牛卵母细胞的牛犊［2］。但水牛方面的研究较少，国内开展水牛卵母细胞冷冻保存的报道也较少，仅见西南大学和广西大学研究人员开展了部分研究，整体上还停留在初步探索的阶段［3-9］。本试验在借鉴牛羊胚胎冷冻的基础上开展水牛MⅡ期卵母细胞的玻璃化冷冻保存和水牛G V期卵母细胞常规冷冻保存，以比较不同冷冻保护剂组成及冷冻载体对MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻保存解冻后的发育影响，同时探索不同预处理时间和平衡时间对水牛G V期卵母细胞常规冷冻保存的影响。

1 材料与方法

1.1 试验用各种液体的配制

1）抽卵液：TCM-199（GIBCO）。

2）体外成熟液：TCM-199+15 μg/mL FSH（ICP）+15 μg/mL LH（Bioniche）+1 μg/mL E2（Sigma）+100 μmol/L半胱胺（Sigma）+10%FBS（Hyclone）。

3）mSOF 液：NaCl 0.629 4 g，KCl 0.053 4 g，KH2PO40.016 2 g，NaHCO30.210 6 g，乳酸钠 0.037 0 g，丙酮酸钠0.003 6 g，青霉素 0.006 5 g，链霉素 0.005 0 g，CaCl2·2H2O 0.0072g，MgCl2·6H2O0.0348g，超纯水溶解定容到100mL，调 pH 至 7.2～7.4，0.2 μm 滤膜过滤器过滤灭菌，4℃保存。……