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野桑蚕丝胶1基因Ser1A′及其上游调控序列的克隆和序列分析*

2011-06-02陈典刚张永红李春峰周泽扬

蚕学通讯 2011年2期

黄 科 伍 杰 陈典刚 张永红 李春峰 周泽扬,3

(1.西南大学蚕学与系统生物学研究所,生物技术学院,重庆 400716;2.重庆文理学院花卉研究所,重庆 402160;3.重庆师范大学生命科学学院,重庆 401331)

蚕丝蛋白主要由丝素和丝胶组成。丝胶蛋白在中部丝腺特异表达,主要由丝胶1蛋白和丝胶2蛋白组成[1-2]。家蚕丝胶1蛋白由4条不同的mRNA编码,由同一条mRNA经不同的剪切方式形成,其长度分别为10.5kb、9.0kb、4.0kb和2.8kb[3]。1997年Garel A等比较系统地阐明了家蚕4.0kb丝胶1基因的mRNA序列,在家蚕基因组中丝胶1基因含8个内含子[4]。丝胶2基因也通过不同的剪切方式形成两条mRNA编码丝胶2蛋白[2]。丝胶1蛋白和丝胶2蛋白的表达受到组织的严格调控,也受到幼虫发育时期的调控[5]。基因转录调控中,启动子是关键,启动子序列所含的顺式作用元件与转录调控因子的结合决定基因的转录。家蚕丝胶1基因启动子中存在三个顺式作用元件SA(-103~-85)、SB(-149~-135)和SC(-204~-183),都能特异的与转录因子(SGF-1,SGF-3)结合[6]。丝腺转录因子1(SGF-1)属于head/HNF-3家族,能特异结合SA位点,认为决定了丝胶1基因的组织特异性表达[7]。体外转录实验表明去除SA元件能下调丝胶1基因启动子的活性[6]。丝腺转录因子3(SGF-3)在丝腺核抽提物中含量最多,能与SC位点特异的结合,体外转录实验同样证明去除SC位点丝胶1基因启动子的活性也存在下调[8]。

我们在克隆家蚕丝胶1基因上游调控序列构建中部丝腺特异表达转基因载体时,发现不同家蚕品系丝胶1基因上游调控序列存在差异,在调查的66个家蚕品系中,丝胶1基因上游调控序列的-1015~+48位置存在多态性,PCR扩增结果有1063bp、636bp及同时出现这两种条带的情况[9]。……

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