杨 军，刘运海

(1常宁市人民医院，湖南常宁421500;2中南大学湘雅医院)

胶质母细胞瘤(GBM)是最常见的颅内高度恶性肿瘤。现代分子遗传学已经证实，肿瘤的发生和发展与抑癌基因和癌基因的改变密切相关。MDM2基因定位于人染色体12q13～14，编码491个氨基酸，MDM2蛋白的主要功能是p53蛋白酸性活化域直接结合形成复合物，从而抑制野生型p53介导的转录激活功能，阻断p53的细胞生长抑制作用，将野生型p53控制在较低无活性水平。MDM2过度表达时会促进肿瘤的发生发展，还会造成肿瘤对放疗、化疗的耐受，与肿瘤的不良反应有关［1］;而MDM2启动子区SNP309(309T＞G)能加强SP1转录因子的结合能力，从而使MDM2的转录增强和表达增加，直接抑制p53，进一步削弱其肿瘤抑制作用［2］。本研究对MDM2基因启动子309位点多态性与GBM易感性的关系进行分析。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2007年2月～2010年7月于中南大学湘雅医院就诊的GBM患者95例(病例组)，男 55例、女 40例，年龄 32～75(58.56±12.09)岁。均为影像学资料拟诊为GBM，经术后组织病理证实。对照组为同期健康体检者95例，男55例、女40例，年龄27～83(60.56±11.78)岁。两组年龄、性别具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 采集患者外周血5 ml，通过酚—氯仿法提取外周血单个核细胞基因组DNA。

1.2.2 MDM2基因多态性检测 采用PCR-RFLP方法检测MDM2 SNP309基因型，下游引物序列F:5'-GATTTCGGACGGCTCTCGCGGC-3'，R:5'-CATCCGGACCTCCCGCGCTG-3'。PCR产物用限制性内切酶PstⅠ37℃孵育2 h，2.5%琼脂糖凝胶观察酶切结果，野生型纯合子(T/T型)为104、17 bp两个片段;突变型纯合子(G/G型)为121、17 bp两个片段;杂合子(T/G型)为121、104和17 bp三个片段。同时随机抽取三种基因型的样本进行PCR产物直接测序验证，结果与PCR-RFLP方法所得结果一致。……