李晓倩

(泰山医学院生物科学系，山东 泰安 271016)

药用真菌和药用植物内生真菌作为重要的微生物资源，近年来在抗肿瘤、抗菌、抗病毒［1-2］等方面发挥着越来越重要的作用，现已被广泛应用于生物医药、食品及生物防治等领域。真菌的鉴定工作是真菌资源开发的关键环节。目前，真菌的鉴定仍以形态鉴定为主，但有一些药用真菌形态特征不易辨认或者不易产生子实体，有的药用植物内生真菌在人工培养基中不产孢，这给真菌的分类鉴定工作带来了很大的困难。随着分子生物学技术的不断发展，提取真菌的基因组DNA进行分子鉴定已成为真菌分类鉴定的一种重要方式。核糖体DNA上的内转录间隔区(internal transcribed spacer，ITS)是存在于18S rDNA、5.8S rDNA和28S rDNA之间的区域，该区域受外界环境因素的影响较小，与编码区域相比具有进化速度快的特点，在种内的不同菌株之间高度保守，而在真菌种间存在极大的变化，表现出极大的序列多态性，可以为真菌学的研究提供丰富的遗传信息［3］，已广泛用于药用真菌如冬虫夏草［4］、金耳［5］等的系统发育以及不产孢植物内生真菌［6-7］的分类鉴定等研究。

优化简便易行的真菌高质量基因组DNA提取方法将会对真菌鉴定工作提供便利。高质量DNA要求高纯度、无蛋白、糖类、酚类、盐类等杂质污染，高分子量、无降解和有一定的数量。药用真菌和药用植物内生真菌的细胞壁都含有复杂的多糖物质、色素以及成分不明的粘稠胞壁物质，这些物质的存在常导致制备的基因组DNA样品中带有不同数量的多糖和其它成分，影响基因组DNA样品的限制性酶切、连接以及PCR反应等操作。……