河北科技大学生物科学与工程学院 韩雪

河北省兽药监察所 李研东

黑龙江八一农垦大学食品学院 王 颖

乳酸菌是一种在食品发酵工业和微生态制剂中广泛应用的益生菌。它可以抑制或杀死一些病原菌和腐败菌，有利于人和动物的健康。细菌素是乳酸菌发挥益生作用的主要物质。因其具有高效、无毒、无残留、无抗药性等优点，已成为抗生素有效的替代物（周志江等，2006）。本试验旨在筛选产广谱细菌素乳酸菌菌株，为细菌素联合物或细菌素与其他抗菌剂联合使用创造条件，弥补使用单一细菌素的缺陷和不足。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 乳酸菌来源 君乐宝酸奶、完达山老酸奶、槐茂酱菜、灵生阿里郎韩国泡菜（市售）；10份东北发酵酸白菜（自制）。

1.1.2 试验菌株 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌为河北科技大学生物科学与工程学院保留菌种。

1.1.3 TGE培养基 蒸馏水 1000 mL、pH值为6.5、蛋白胨 10.00 g、酵母浸提物 4.00 g、牛肉膏6.00 g、葡萄糖10.00 g、硫酸锰0.05 g、硫酸镁0.10 g、吐温 80 0.2%，0.08 Mpa灭菌 30 min（韩雪和周志江，2006）。

1.2 产抑菌物质乳酸菌的分离 沾取原料液于TGE固体培养基上划线培养，37℃静置培养48 h。用接种环挑取单菌落接种于TGE液体培养基，37℃，培养48 h。发酵液10000 r/min离心15 min，取上清，用软琼脂扩散法验证发酵上清液的抑菌效果。

平板底层平铺薄薄一层固体TGE培养基，再将10 mL含有l06CFU大肠杆菌/枯草芽孢杆菌的软琼脂平铺在固体TGE上，用打孔器在铺好培养基的平板上打直径为5 mm的孔，取发酵上清100 μL加入到孔中，37℃静置培养24 h后，检查平板上形成的抑菌圈。

1.3 产抑菌物质乳酸菌的鉴定 挑选形成抑菌圈的菌株做革兰氏染色，观察菌体形态和染色特征，进行过氧化氢酶试验、耐热试验。……