袁明霞，赵辉

（哈药集团生物疫苗有限公司，黑龙江哈尔滨 150069）

革兰氏阴性菌疫苗在生产过程中常出现因配制工艺、抗生素不当应用引起菌体崩解，导致内毒素释放，使注射动物出现一系列临床反应：肿头，肿脸，停食停水，局部炎症，休克，死亡；生产性能降低；免疫功能下降，易发病，对疫苗应答下降。有研究报道甘氨酸（Gly）能显著拮抗内毒素的致热性，能在一定程度上破坏内毒素的超微结构，从而干扰其活性；而多粘菌素B（PMB）是有效的内毒素拮抗剂。本试验联合应用甘氨酸和多粘菌素B，确定其在仔猪水肿病多价灭活疫苗中拮抗内毒素释放的效果，并找出二者的最佳配合比例。

一、材料与方法

表1 PMB+Gly联合应用效果实验分组情况

（一）试验材料

1.猪大肠杆菌生产菌种。猪大肠杆菌C83684、C83905、C83902株，购自中国兽医药品监察所，ED0301菌株由哈药集团生物疫苗有限公司分离鉴定。

2.培养基。营养琼脂平板和营养肉汤按《兽药典》附录方法制备。

3.试验动物。体重为16～18 g小鼠和14日龄健康易感仔猪，由哈药集团生物疫苗有限公司实验动物

中心提供。

（二）试验方法

1.猪大肠杆菌菌液制备。将各菌株分别接种于营养琼脂平板复苏培养，按“规程草案”方法制备生产用二级菌种，以5%接种于含0.5%甘油营养肉汤中，逐渐增大通气量，于37℃通气培养18 h，然后分别取样，测定菌液中细菌数量。

表2 疫苗中联合应用PMB+Gly对小鼠的作用效果

2.菌液浓缩与灭活。取检验合格的猪大肠杆菌灭活菌液经4 000 r/min，离心30 min，弃去7/8上清液后，将菌体悬……