1 材料

1.1 药物

异麦芽低聚糖、低聚果糖等低聚糖购自广东溢多利生物科技股份有限公司。

1.2 菌种

双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠杆菌由中国兽医药品监察所提供。

1.3 培养基

BS培养基、LBS培养基、BL肉汤培养基、MRS液体培养基、营养肉汤培养基和营养肉汁琼脂培养基均自制。

2 方法

2.1 复合低聚糖的制备

将异麦芽低聚糖、低聚果糖按一定比例进行混合，均匀搅拌。

2.2 低聚糖培养基的制备

将复合低聚糖分别按1%、3%、5%加入BL肉汤、MRS液体培养液和营养肉汤培养基中，制备成浓度分别为1%、3%、5%的BL肉汤、MRS液体和营养肉汤复合低聚糖培养基，同时配制不含复合低聚糖的BL肉汤、MRS液体和营养肉汤培养基作为正常对照组。将不同浓度的BL肉汤、MRS液体和营养肉汤复合低聚糖培养基及不含复合低聚糖的BL肉汤、MRS液体和营养肉汤培养基的pH值分别调至7.22、6.25和6.83，以5 mL/管分装。

2.3 菌液的制备

将双歧杆菌、乳酸杆菌经复活后，各取一定的纯菌液分别接种于5 mL的BL肉汤和5mL的MRS液体培养基中。37 ℃，48 h厌氧培养后，用无菌生理盐水水洗3 次（2 500 r/min×5 min）。用麦氏比浊管调整菌液浓度为6×108CFU/mL，经纯菌检查证实为无污染的纯细菌悬液。将大肠杆菌复活后，取一定的纯菌液接种于5 mL营养肉汤培养基中，37 ℃摇床，18 h培养后，经纯菌检查证实为无污染的纯细菌悬液。

2.4 培养计数

取含不同浓度的BL肉汤、MRS液体和营养肉汤复合低聚糖培养基各1 支作为试验组，其中1%、3%、5%的BL肉汤复合低聚糖培养基标示为1、2、3，1%、3%、5%的MRS液体复合低聚糖培养基标示为4、5、6，1%、3%、5%的营养肉汤复合低聚糖培养基标示为7、8、9；取不含复合低聚糖的BL肉汤、MRS液体和营养肉汤培养基管各1 支作为对照组，标示为A、B、C。……