李沅，姜熙，樊铂，崔红天津市医疗器械质量监督检验中心，天津，300191

高效液相色谱法测定药物涂层支架中zotarolimus的含量

【作者】李沅，姜熙，樊铂，崔红天津市医疗器械质量监督检验中心，天津，300191

目的建立药物涂层支架中zotarolimus的含量测定方法。方法高效液相色谱法，使用Zorbax Eclipse XDB-C8(4.6×75 mm 3.5 μm)色谱柱；流动相MPA(醋酸盐缓冲液：乙腈=51:49)、 MPB(醋酸盐缓冲液：乙腈=5:95)；检测波长278 nm。结果在质量浓度5 μg/ml～75 μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.99986)，平均回收率为101.58%，RSD=0.68% (n=6)。结论本方法简便、准确、重现性好，可用于药物涂层支架中zotarolimus的含量测定。

高效液相色谱法；药物涂层支架；zotarolimus；含量测定

药物涂层支架是将药物直接或通过适当的载体涂布于金属支架表面，成为一种药物缓释系统。广义的药物涂层支架分为两大类：一类是在支架表面包被磷酸胆碱、肝素、碳化物和硅碳合金等，以减少血栓的形成或降低再狭窄率（被动涂层）；另一类则是通过支架表面的特定载体控制释放某些抗增生的药物（如雷帕霉素或紫杉醇等）或基因、细胞等，通过与血管壁持续作用而抑制支架术后血管内膜的过度增生，从而降低再狭窄的发生率（主动涂层）。后者常被称为药物洗脱支架[1]。药物在局部以“洗脱”方式缓慢释放，可以满足靶部位的有效药物浓度，降低全身毒副反应，并在（涂层）对药物的缓释作用下获得足够的作用时间。Zotarolimus涂层支架是美国美敦力公司的产品。Zotarolimus作为雷帕霉素的一种新型衍生物，具有较强的抗冠脉平滑肌细胞增殖的活性，且能有效抑制免疫机制的作用[2]。研究表明，Zotarolimus洗脱支架在4周后可明显起到降低内膜增生的作用[3]。

由于药物涂层支架在预防冠脉再狭窄方面较金属裸支架具有明显优势，因此近年来带药支架在冠脉介入治疗中的应用数量日趋增多。然而，目前国内的医疗器械质检部门对药物涂层支架中的药物成分分析和含量测定的研究尚处于起步阶段，相关研究报道较少。这主要是由于不同器械制造商的涂药工艺，涂层特性和药物种类千差万别，给药物涂层支架中的药物提取和鉴别测定带来了一定的困难。针对不同设计属性的器械，质检机构需要设计不同的试验方案，并在此基础上对分析特定药物的色谱条件进行研究。本文在大量试验的基础上，建立了Zotarolimus涂层支架中药物含量的高效液相色谱测定方法。该方法操作简单，重现性好，结果稳定，为保证该类产品的质量提供了有价值的质控方案。

1 仪器与试药

1200型高效液相色谱仪(美国安捷伦)，UV紫外检测器，G1316A型色谱工作站。Zotarolimus对照品(台湾神隆股份有限公司提供 Batch No：71061AA019)。zotarolimus药物涂层支架（批号为0001928216，0001928217，0001928218，美国美敦力公司提供)。乙腈为色谱纯，醋酸氨为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱Zorbax Eclipse XDB-C8(4.6×75 mm 3.5 um )；流动相MPA（醋酸盐缓冲液：乙腈=51:49）和 MPB（醋酸盐缓冲液：乙腈=5:95）；梯度洗脱时间见表1。

表1 梯度洗脱时间表Tab.1 Gradient elution time-table

采集前27 min内的数据。

2.2测试条件

柱温45±2oC；检测波长278 nm；流速1.5 ml/min；进样量20 μl。

2.3溶液配制

2.3.1 供试品溶液 用移液管精密量取适量MPA移入棕色试样瓶中，将测试药物支架置入提取介质中(支架必须完全浸入浸提介质中)。用聚四氟乙烯内衬螺帽盖住试样瓶。用超声波对样品进行加速溶解，（超声波水浴温度控制在20oC～35oC）。提取液经0.45 μm滤膜过滤，滤液直接进样分析。

2.3.2 对照品溶液 精密称取Zotarolimus对照品20 mg，用乙醇定容至100 ml容量瓶，作为标准储备液。用移液管将2.5 ml、7.5 ml、12.5 ml、25 ml、37.5 ml储备液移入100 ml容量瓶，并用MPA进行稀释，制得5 μg、15 μg、25 μg、50 μg、75 μg /ml对照品溶液。

图1 高效液相色谱图Fig.1 HPLC curves

2.4 方法适用性试验 依给定的色谱条件，分别取空白溶液、对照品溶液和供试品溶液各20 μl，分别进样，记录色谱图。它们的色谱图分别为图A、图B和图C。zotarolimus主峰的保留时间约为22 min,与其异构体组分峰的分离度为2.18，理论板数为7293[4]。

2.5线性关系

分别取“2.3.2”项下方法配制的对照品溶液，按给定的色谱条件进行测定，记录各浓度的色谱峰面积。以峰面积(Y)对溶液浓度(X)求回归方程为Y=3611108X-2.45596(r=0.99986)，在5 μg/ml～75 μg/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.6精密度试验

取浓度为25 μg/ml的对照品溶液连续进样5次，RSD=0.47%，表明所选定的色谱条件系统稳定。

2.7重现性试验

取同一批样品（批号0001928216）5件，按“2.3.1”项下方法配制供试品溶液，分别进样，记录峰面积并计算含量，结果的RSD=0.43%(n=5)，表明方法重现性好。

2.8回收率试验

取6份已知含量的样品，分成3组，每组分别加入对照品溶液（200 μg/ml）0.2ml、0.1ml、0.05 ml，测定峰面积，计算回收率。结果见表2，测得平均回收率为101.58%，RSD=0.68%(n=6)。

表2 加样回收试验结果（n=6）Tab.2 Results of the labeled recovery rate（n=6）

2.9稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，按给定的色谱条件在 0 h、2 h、4 h、6 h和8 h分别进样测定峰面积，RSD=0.9%，表明样品溶液在8 h内稳定。

2.10样品含量测定

取3批样品，分别按供试品溶液的制备方法，制备待测溶液。取20μl进样，分别进样2次，测定峰面积，计算含量，记录色谱图见图1C，结果见表2。另按给定的色谱条件，取20 μl标准品及空白溶液进样，分别记录色谱图，见图1B和图1A。按外标法以峰面积计算，3批样品含量测定结果，见表3。

表3 样品含量测定结果（n=3）Tab.3 Results of the sample drug content（n=3）

3 讨论与小结

3.1 由于溶剂及药物中的其它杂质在100%MPA的流动相条件下洗脱时间较长，为了缩短分析时间，同时避免杂质峰对下一个待测样品的干扰，故采用梯度洗脱的方式。在Zotarolimus及其异构体完全洗脱后，改变流动相比例达到快速分离杂质的目的。

3.2 将Zotarolimus对照品溶液置紫外-可见分光光度计于240 nm～320 nm波长范围内扫描，确定待测物质Zotarolimus的最大吸收波长为278 nm,并以此作为检测波长。

3.3 在样品处理过程中，超声处理可使样品溶解充分，经超声处理可去除未被滤除的微小不溶物，以确保溶液澄清。超声波水浴温度控制在20oC～35oC，防止zotarolimus分解。

3.4 本试验待测组分有两个色谱峰，分别是zotarolimus及其异构体，应按峰面积加和法计算。此方法更能准确测定zotarolimus总量。

3.5 通过对3批药物支架含量的测定表明，该方法操作简单，重现性好，结果稳定。由于药物支架的含量测定方法国内报道不多，故此研究为保证该产品的质量提供了有价值的测定方法。

[1] 马长生. 冠心病介入治疗——技术与策略[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2001

[2] Chen YW, Smith ML, Sheets M, et al. Zotarolimus, a novel sirolimus analogue with potent anti-proliferative activity on coronary smooth muscle cells and reduced potential for systemic immunosuppression[J]. Cardiovasc Pharmacol, 2007, 49: 228-235.

[3] Garcia-Touchard A,Burke SE, Toner JT, Cromack K, Schwartz RS.Zotarolimus-eluting stents reduce experimental coronary artery neointimal hyperplasia after 4 weeks[J]. Eur Heart, 2006, 27: 988-993.

[4] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部), 附录VD. 北京: 化学工业出版社, 2005

国产智能胶囊式内窥镜系统

胶囊式内窥镜系统与传统消化系统内镜检查不同，患者在吞服智能胶囊后，智能胶囊在其消化道内运动的过程中，可对消化道壁进行实时摄像，并将数字信号传输至患者体外携带的图像记录仪上。医生借助图像记录仪和影像工作站系统分析所采集到的图像，便可对病情做出进一步诊断，而胶囊则随患者排泄物自行排出。整个过程无创伤、无痛苦、无交叉感染，不影响患者的正常工作，免除了传统检测方法所带来的痛苦和不便，同时又解决了传统内镜不能较好检查小肠部位的问题。

胶囊式内窥镜系统是微电子技术、图像处理技术、无线通信技术等与生物医学相结合的一项高科技项目，回音必集团杭州华冲科技有限公司承担国家“863”计划微电子领域课题、国家医疗诊断设备重点攻关项目研制工作的数年间，在国家“863”计划项目组的指导和协助下，科研人员坚持不懈地创新，在HT型胶囊式内窥镜系统在低功耗数模混合集成电路芯片解决方案、低功耗SOC系统设计、射频无线启动开关、医学图像处理以及高清数字视频的研发等方面获得重大突破，达到世界先进水平。

HT型胶囊内镜系统的体积、分辨率和重量等方面与国内同类型产品相比，有明显改进。尤其是胶囊内的核心技术部分——主控芯片，拥有我国自主知识产权。该项创新降低了胶囊式内窥镜的功耗和成本。在采用相同电池的情况下，该胶囊式内窥镜的工作时间比同类产品长1.5～2倍，这样医生就有足够的时间进行完整的小肠检查，即使对肠胃蠕动能力差的患者也可以轻松完成。

2011年3月1日，HT型胶囊式内窥镜系统获得国家食品药品监督管理局颁发的医疗器械注册证。3月7日-14日在北京国家会议中心“十一五”国家重大科技成就展医药重大专项展区展出，受到好评。

全球消化系统疾病发病率逐年上升，我国每年就有至少8000万人接受胃肠道疾病检查。若按1%的患者接受胶囊式内窥镜检查计算，国内就已有近30亿元的市场规模，前景很诱人。

胶囊式内窥镜制造基地已在杭州经济技术开发区建成，一期工程将形成年产智能胶囊10万粒的产能。

（本刊讯）

Determination of the Content of Zotarolimus on the Drug Eluting Stents by HPLC

【Writers 】Li Yuan, Jiang Xi, Fan Bo, Cui Hong Tianjin Supervision and Testing Center for Medical Devices, 300191

HPLC, drug stent, zotarolimus, content determination

TH781

B

10.3969/j.issn.1671-7104.2011.02.017

1671-7104(2011)02-0134-03

2010-09-25

姜熙，E-mail: jiangxi8305@126.com

【 Abstract 】ObjectTo establish a method for the content determination of zotarolimus on the durg eluting stents.MethodsHPLC analysis was carried out with Zorbax Eclipse C8 colum(4.6×75 mm 3.5 μm)and MPA acetate buffer solution: acetonitrile (51:49), MPB acetate buffer solution: acetonitrile(5:95)as the mobile phase. The detection wavelength was 278 nm.ResultThere was a good linear relationship between the concentration of zotarolimus and the areas in the range of 5 μg/ml～75 μg/ml (r=0.99986). The average recovery was 101.58% with RSD 0.68%(n=6).ConclusionThe method is simple, accurate and reproducible. It can be used as the quality test for zotarolimus on the durg eluting stents.