刘 红,朱朝辉

(广东省农业科学院畜牧研究所畜禽育种国家重点实验室,广东 广州 510640)

禽白血病是由禽白血病病毒(ALV)引起的一种传染性肿瘤病。ALV在鸡群中的存在分为A、B、C、D、J、E等多种亚型。近10年所报道的分离的ALV毒株大部分为J亚群,少部分为A、B亚群。目前国内外已经建立了很多ALV的检测方法,如酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光试验(IFA)、聚合酶链式反应(PCR)、原位杂交(ISH)、荧光定量RT-PCR(QRT-PCR)等。本文就目前国内外禽白血病的检测中较常用的一些方法做一简述。

1 抗原检测方法

1.1 ELISA方法 ELISA方法的特点是特异性、敏感性高,设备要求低,适合大批量的流行病学调查和生产净化。Ignyatovic等在1982年报道用抗原捕获ELISA的方法进行GSA p27抗原检测。韩静等用抗A LV-p27的多克隆抗体建立了双抗体夹心ELISA 方法用于检测 A、B、J亚群A LV[1]。

目前市场上已有用于检测ALVp27抗原ELISA试剂盒出售。不同试剂盒之间敏感性存在差异,郭慧君等对3种ELISA抗原检测试剂盒进行灵敏度比较,发现3者之间灵敏度差异显著[2]。

在样品选择方面,有研究表明蛋清中内源性ALV的ELISA反应假阳性结果少,因此蛋清样品被认为是ALV抗原ELISA检测的理想材料。

1.2 IFA方法 IFA方法可对抗原进行细胞定位。但是该检测方法有时会产生非特异性荧光,且仅限于实验室检测。1983年Spencer等就建立了针对GSA抗原的IF技术,用于自然感染ALV的产蛋母鸡的病毒传播和感染分布检测[3]。

1.3 PCR方法

1.3.1 直接PCR 用PCR方法检测A LV核酸,是判断病毒能否复制的一种指标。中国农业大学徐镔蕊等从病死鸡的肿瘤和组织中提取DNA,用设计的 ALV-J 引 物 H5/H7(H5:5′-GGATGAGGTGACTAAGAAAG-3′,H7:5′-CGAACCAAAGGTAACACACG-3′)进行 PCR扩增和序列测定,从分子水平上证实了蛋鸡J亚群禽白血病的发生[4]。……