阙文忠，陈君敏

(福建医科大学附属第一医院血液风湿科，福建福州 350005)

肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)是一种多功能的蛋白，作用于肿瘤细胞表面的跨膜受体c-Met蛋白［1］，从而引起肿瘤细胞的增殖、侵袭、黏附及促进新生血管的生成作用［2］。研究发现［3－6］，在多种肿瘤组织和细胞中高表达c-Met蛋白。此外，在肿瘤病人的血清和骨髓中发现HGF浓度明显高于正常人，并且发现这与病人治疗效果及其预后呈负相关［7－8］。这些结果表明 HGF/c-Met通路在肿瘤的发生和发展中具有重要的作用。NK4是肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)α链的含447个氨基酸的片段，包括N末端的发夹结构和4个kringle结构，编码序列长度1 434 bp。研究表明NK4能和HGF竞争性结合c-Met蛋白，使后者无法发生磷酸化，从而抑制HGF所诱导的肿瘤生长、浸润及血管生成活性，是第一个能全面拮抗HGF活性的生物分子［9－10］。

由Invitrogen公司开发的Gateway技术是一种通用型克隆方法，其基于λ噬菌体位点特异性重组系统，利用位点特异重组构建入门载体［11－12］，整个过程没有限制性内切酶和连接酶的参与。一旦拥有了一个入门克隆，就可以多次使用它，转移需要的目的基因到Gateway改造过的各种表达载体(目的载体)。这项强大的体外技术大大地简化了基因克隆和亚克隆的步骤，而同时典型的克隆效率高达95%或以上。当基因在目的表达载体之间快速简便的穿梭时，还可以保证正确的方向和阅读框，因而也不必再为新的表达克隆测序担心。这样就能高效、快速地将目的基因克隆到其它的受体载体或目的载体上。……