蒋宏伟，陈茂盛，周晓黎，李 剑，董 俊，叶玲玲，艾 军，马玉玲，吴双民，杨建明

（1.陕西出入境检验检疫局，陕西 西安 710068；2.云南出入境检验检疫局，云南 昆明 650228）

1 概况

羚牛是一种极难得的大型牛科稀有珍贵动物。外形长相奇特，庞大隆起的背脊像棕熊，两条倾斜的后腿像非洲的斑鬣狗，四肢短粗像家牛，绷紧的脸部像驼鹿，宽而扁的尾像山羊，两只角长得像角马，称为“六不像”，外形似牛，机体结实又介于山羊和羚羊之间，但在牙齿、角、蹄子等更接近羊。羚牛有四个亚种，高黎贡羚牛亚种（Bt taxicolor）、不丹羚牛亚种（Bt whitei）、四川羚牛亚种（Bt tibetana）和秦岭亚种（Bt bedfordi），其中四川亚种和秦岭亚种是中国的特有亚种。此次送给日本的4头羚牛是秦岭亚种，秦岭亚种主要生活在秦岭西段—陕西省多个县境内，是四个亚种中最漂亮的亚种，数量稀少，为国家一级保护动物，被视为“国宝”。为了进一步增强中日友谊，我国政府决定无偿捐赠给日本的野生动物保护部门4头羚牛，中日双方共同签定了《中华人民共和国向日本出口展览用羚牛的卫生要求》（以下简称检疫条款），并由陕西出入境检验检疫局实施隔离检疫，陕西局局党组非常重视此项任务，从严格监督隔离场选址和建设，到实施隔离检疫和实验室检验等工作认真部署、精心安排，促使隔离检疫任务得以圆满完成。

按照检疫条款，我们于2010年10月24日至2011年元月22日完成了对羚牛实施样品采集、口蹄疫、牛肺疫、蓝舌病、布氏杆菌病、结核病、副结核病、牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻-粘膜病、钩端螺旋体病、边虫病、焦虫病、锥虫病等12种动物疫病临床及实验室检疫，4头羚牛检疫结果符合检疫条款要求，于2011年元月25日乘飞机离开西安到日本大阪，去“完成”进一步增强中日友谊的使命。

2 检疫检验

2.1 检疫依据

依据中日双方共同签定的《中华人民共和国向日本出口展览用羚牛的卫生要求》对该批羚牛实施90天的隔离检疫。

2.2 样品采集

按检疫条款规定，分别于隔离检疫期间的前30天和后30天采集不同样品，实施两次实验室检验。

2.2.1 动物保定

采样样品前由野生动物保护中心对羚牛实施麻醉。

2.2.2 采样

2.2.2.1 首先，于隔离检疫期间的前30天，在羚牛麻醉状态下颈静脉采集血样。

2.2.2.2 第二次采样为隔离检疫期间的后30天，在羚牛麻醉状态下颈静脉采集血样、食道探杯采集食道-咽喉液（OP液）和血涂片，分别进行相关疫病检疫检验。

2.3 实验室检验项目及方法

2.3.1 隔离检疫期间前30天的检验

隔离检疫期间的前30天，采集羚牛血清样品，实施口蹄疫、副结核病等疫病的实验室检验及结核菌素皮内变态反应。

2.3.1.1 口蹄疫检验（按规定须由我国口蹄疫参考实验室兰州兽医研究所承担）

2.3.1.1.1 抗体捕捉酶联免疫吸附试验

按检疫条款要求，使用英国动物卫生研究所Pirbright实验室提供的抗体捕捉—ELISA试验试剂盒，完成了对羚牛血清中口蹄疫O型、A型、C型和亚洲1型的抗体检测。

2.3.1.1.2 病毒中和试验

分别用口蹄疫O型、A型和亚洲1型标准毒株，完成对羚牛血清中各型中和抗体检测。

2.3.1.2 副结核病检验

使用美国IDEXX公司提供的酶联免疫吸附试验试剂盒，完成对羚牛血清中副结核分枝杆菌抗体检测。

2.3.2 隔离检疫期间后30天的检验

按检疫条款规定，隔离检疫期间的后30天，采集OP液和血样，实施口蹄疫、牛肺疫、蓝舌病、布氏杆菌病、牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻-粘膜病、边虫病、焦虫病、锥虫病等疫病的实验室检验。

2.3.2.1 口蹄疫检验（由口蹄疫参考实验室兰州兽医研究所承担）

2.3.2.1.1 病毒分离

用OP液进行病毒分离和RT-PCR试验，完成了对4头羚牛OP液中口蹄疫病毒的检验。

2.3.2.1.2 抗体捕捉酶联免疫吸附试验

使用英国Pirbright实验室的抗体捕捉—ELISA试验试剂盒，完成了对4头羚牛第二次血清中口蹄疫病毒O型、A型、C型和亚洲1型的抗体检测。

2.3.2.1.3 病毒中和试验

分别采用口蹄疫O型、A型和亚洲1型标准毒株，完成对第二次羚牛血清中各型中和抗体检测。

2.3.2.2 牛肺疫检验

按检疫条款规定，牛肺疫采用补体结合试验，其抗原由日本提供，补体、溶血素、绵羊红细胞自备，正式试验之前进行溶血素、抗原和补体的效价测定，完成了对4头羚牛牛肺疫抗体检测。

2.3.2.3 蓝舌病

采用云南出入境检验检疫局提供的蓝舌病琼扩免疫扩散抗原、阳性对照血清、阴性对照血清，对被检羚牛血清实施蓝舌病抗体检测。

2.3.2.4 布氏杆菌病

采用布氏杆菌病试管凝集试验（抗原、阳性血清、阴性血清由中国动物CDC提供），对被检羚牛血清实施布氏杆菌抗体检测。

2.3.2.5 牛传染性鼻气管炎

实验用牛传染性鼻气管炎标准毒株由中国兽药监察所提供，使用MDBK细胞，按要求，采用病毒中和试验对被检羚牛血清实施牛传染性鼻气管炎中和抗体检测。

2.3.2.6 牛病毒性腹泻-粘膜病

2.3.2.6.1 血清中和试验

牛病毒性腹泻-粘膜病标准毒株由中国兽医监察所提供，使用MDBK细胞，完成对羚牛血清牛病毒性腹泻-粘膜病中和抗体检测。

2.3.2.6.2 病毒分离

采用实时荧光定量PCR技术，完成对被检羚牛样品的牛病毒性腹泻-粘膜病病毒核酸检测。

2.3.2.7 边虫病

按检疫条款规定，边虫病采用补体结合试验，其抗原、阳性对照血清、阴性对照血清由日本提供，补体、溶血素、绵羊红细胞自备，正式试验之前进行溶血素、抗原和补体的效价测定，完成了对被检羚牛血清牛肺疫抗体检测。

2.3.2.8 锥虫病

按检疫条款规定，完成对羚牛实施血液涂片、姬姆萨染色，锥虫病显微镜检查。

2.3.2.9 焦虫病

按检疫条款规定，完成对羚牛实施血液涂片、姬姆萨染色，焦虫病显微镜检查。

2.4 临床检疫

2.4.1 隔离检疫期间前30天

按检疫条款规定，对羚牛实施牛肺疫、蓝舌病、布氏杆菌病、结核病、副结核病、牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻-粘膜病、钩端螺旋体病、边虫病、焦虫病、锥虫病和其他疾病的临床检验。

2.4.2 隔离检疫期间后30天

按检疫条款规定，对羚牛实施结核病、副结核病和其他疾病临床检验；用指定药物进行钩端螺旋体病防治。

2.5 检疫结果

2.5.1 隔离检疫期间前30天检验结果

2.5.1.1 口蹄疫

2.5.1.1.1 抗体捕捉酶联免疫吸附试验（用英国动物卫生研究所Pirbright实验室提供的抗体捕捉—ELISA试验试剂盒）

所有羚牛血清检测结果均为口蹄疫O型抗体阴性、Asia 1型抗体阴性、A型抗体阴性和C型抗体阴性。

2.5.1.1.2 病毒中和试验

所有羚牛血清检测结果均为口蹄疫O型病毒中和抗体阴性、Asia 1型病毒中和抗体阴性、A型病毒中和抗体阴性。

2.5.1.2 副结核分枝杆菌病

所有羚牛血清检测结果均为副结核分枝杆菌抗体阴性。

2.5.1.3 临床检疫

所有羚牛临床表现健康，均未发现应检疫病临床症状。

2.5.2 隔离检疫期间后30天检验结果

2.5.2.1 口蹄疫

2.5.2.1.1 病毒分离

2.5.2.1.1.1 OP液病毒分离

所有被检羚牛OP液口蹄疫病毒分离结果均为阴性。

2.5.2.1.1.2 口蹄疫RT-PCR试验

所有羚牛OP液口蹄疫病毒核酸检测结果均为阴性。

2.5.2.1.2 抗体捕捉酶联免疫吸附试验（用英国动物卫生研究所Pirbright实验室提供的抗体捕捉—ELISA试验试剂盒）

所有羚牛血清检测结果均为:口蹄疫O型抗体阴性、Asia 1型抗体阴性、A型抗体阴性和C型抗体阴性。

2.5.2.1.3 病毒中和试验

所有羚牛血清检测结果均为:口蹄疫O型病毒中和抗体阴性、Asia 1型病毒中和抗体阴性、A型病毒中和抗体阴性。

2.5.2.2 牛肺疫

被检羚牛血清牛肺疫补体结合试验检测结果均为牛肺疫抗体阴性。

2.5.2.3 蓝舌病

被检羚牛血清琼扩试验结果均为蓝舌病抗体阴性。

2.5.2.4 布氏杆菌病

被检羚牛血清布氏杆菌病检测结果均为布氏杆菌抗体阴性。

2.5.2.5 牛传染性鼻气管炎

被检羚牛血清的牛传染性鼻气管炎血清中和试验结果均为牛传染性鼻气管炎血清中和抗体阴性。

2.5.2.6 牛病毒性腹泻-粘膜病

2.5.2.6.1 血清中和试验

被检羚牛血清牛病毒性腹泻-粘膜病血清中和试验结果均为牛病毒性腹泻-粘膜病血清中和抗体阴性。

2.5.2.6.2 病毒分离

被检羚牛检测样品的牛病毒性腹泻-粘膜病病毒核酸结果均为阴性。

2.5.2.7 边虫病

被检血清边虫病补体结合试验结果均为阴性。

2.5.2.8 锥虫病

所有羚牛血液涂片显微镜检查结果均未发现锥虫。

2.5.2.9 焦虫病

所有羚牛血液涂片显微镜检查结果均未发现焦虫。

2.5.3 临床检疫

所有羚牛临床表现健康，均未呈现应检疫病临床症状。

3 小结和体会

3.1 经过90天的隔离检疫，被检羚牛从临床检疫到实验室检验，结果均符合《中华人民共和国向日本出口展览用羚牛的卫生要求》的要求。

3.2 羚牛为野生动物，是国家一级保护动物，性情粗暴，因此，在将选中的羚牛迁移至隔离场所以及对其采集检疫样品时，须实施麻醉。在对羚牛实施麻醉，一定要注意正确地计算每头羚牛的麻醉药注射剂量，以及搬运体位（保持呼吸道的畅通）、解麻后的护理等等，以免造成羚牛窒息。