胡迪超 张爱华 潘勇兵 詹珊珊 杨晓明 (武汉生物制品研究所,武汉430060)

抗人CD25嵌合抗体基因的构建及其瞬时表达研究

胡迪超 张爱华 潘勇兵 詹珊珊 杨晓明 (武汉生物制品研究所,武汉430060)

目的:构建抗人CD25嵌合抗体基因并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达和初步鉴定。方法:采用RLM-R ACE法克隆WuTac抗体可变区和信号肽序列,并利用基因拼接法构建嵌合抗体基因。用脂质体法瞬时转染三种哺乳动物细胞,并使用ELISA、FCM、WB、Dot blot和免疫荧光法进行检测。结果:成功克隆WuTac抗体可变区和信号肽序列,并构建了抗人 CD25嵌合抗体表达质粒。瞬时转染结果表明所表达的嵌合抗体保留了亲本抗体WuTac的抗原结合力。结论:成功构建了抗人CD25嵌合抗体基因,为其进一步研究打下基础。

CD25;RLM-R ACE;基因拼接;嵌合抗体;瞬时表达

IL-2通过与IL-2R结合而活化T细胞,高亲和力的IL-2R 由α链 (CD25,Tac,P55)、β链 (CD122, P70-75)和γ链(CD132,P64)三个亚基组成[1]。人CD25分子为Ⅰ型跨膜糖蛋白,主要表达于活化的T细胞表面,是IL-2的特异性受体,而IL-2Rβ和IL-2Rγ也可作为IL-15R的受体;因此,以CD25为靶标治疗疾病有着很大的潜力[2]。以人CD25为靶标上市的治疗性单抗国外有舒莱(SIMULECT○R,嵌合抗体)和赛呢派 (ZENAPAX○R,人源化抗体),而国产赛呢派(健尼哌○R,上海中信国健药业股份有限公司)也于2011年1月12日获得药品批准文号。抗CD25抗体治疗疾病的作用机制是:(1)抑制了IL-2R的β、γ链异二聚化;(2)不能激活酪氨酸激酶Jak3;(3)酪氨酸残基和STAT的磷酸化发生障碍,从而阻断了T细胞的活化和增殖;(4)通过ADCC和固定补体发挥功能[3,4]。虽然赛呢派在器官移植、多发性硬化症、溃疡性结肠炎、白血病和糖尿病领域也显示出潜力,但其亲和力(3×109M-1)只有亲本抗体抗-Tac单抗的1/3(9×109M-1)[5]。……