李广波，潘 欣，李 晗，蔡家麟，赵子夜，吴鉴今

(1上海市血液中心，上海200433;2中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室)

鼠伤寒沙门菌是重要的肠道致病菌［1］，其在细胞内的感染、增殖及杀灭对疾病的发展和转归有重要意义［2］。该菌细胞壁的脂多糖与受感染细胞膜表面的受体结合以及感染到细胞内的细菌能引起细胞启动杀菌机制，其中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)催化左旋精氨酸(L-Arg)产生的NO 是重要的杀菌物质之一。NO除本身具有杀菌活性外，它还氧化生成NO2、NO－2、N2O3和亚硝基硫醇等杀菌性活性氮中间物(RNI)。这些活性化合物与细菌的关键蛋白或脂质分子反应，杀灭和消化细菌。2009～2011年，我们分别采用野生型鼠伤寒沙门菌活菌和灭活菌感染鼠巨噬细胞，观察了感染后不同时间点感染细胞iNOS的表达情况，同时检测细胞培养液NO浓度以及活菌感染时细胞内沙门菌增殖及细胞对细菌的杀灭情况，分析其随感染时间的变化及三者之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 野生型鼠伤寒沙门菌(ATCC 14028，以下简称沙门菌)购于美国 ATCC;鼠巨噬细胞RAW264.7购于中国科学院上海细胞生物研究所。Trizol总RNA抽提试剂盒购于Invitrogen公司;核酸回收试剂盒购于北京博大泰克公司，RNA反转录试剂盒购于Fermentas;FastStart Universal SYBR Green Master购于罗氏公司;兔抗鼠伤寒沙门菌多抗为本室自备，羊抗兔IgG Alex Fluor 488二抗购于Invitrogen公司;引物由宝生物工程(大连)有限公司合成。SLAN实时荧光定量PCR检测仪购于上海宏石医疗科技有限公司;Olympus IX81荧光显微镜购于日本Olympus公司;Thermo Scientific A2型生物安全柜购于美国Thermo公司。……