张新高 王立欣 侯 杰

（1.广东省深圳市南山区动物防疫监督所，深圳 518051；

2.华南农业大学兽医学院，广州 510642）

北京犬ITS-2 rDNA的PCR扩增、克隆及分析

张新高1王立欣2侯 杰2

（1.广东省深圳市南山区动物防疫监督所，深圳 518051；

2.华南农业大学兽医学院，广州 510642）

本研究以从中国广东深圳某动物医院采集的北京犬血液样品为研究对象，经反复摸索，选用LA Taq 酶结合降落PCR方法，成功地扩增出北京犬的核糖体基因组（rDNA）的第2内转录间隔区（ITS-2）序列。将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pGEM-T Easy载体，用PCR技术及酶切鉴定阳性菌落，对阳性菌落质粒DNA进行测序。结果表明，ITS-2片段大小为1 138bp，GC含量为83.57%。本研究为犬线粒体等真核生物高GC含量序列的有效扩增作了有益的探索。

北京犬 ITS-2 高GC含量 PCR 克隆

人和犬（Canis familliaris）的密切联系已有很长的历史，犬的饲养至少已有14 000年历史，其祖先是灰狼（Canis lupus），犬在世界的普遍饲养，显示其一直以来在人们的生活中起到重要作用[1-2]。在几万年之前，波斯人和希腊人就开始饲养犬这种家畜。在中国西安半坡遗址和常州圩墩遗址中发现了犬的骨骼，推断我国养犬的历史也有约5 000～6 000年之久[3]。近年来，随着国内经济的迅速发展，人们生活水平得到提高，宠物犬饲养量不断增多。对于现代犬种的种群关系以及形态多样的品种之间的亲缘关系，众多研究者一直有很大的兴趣，对于犬品种的多样化的起源以及品种的关系在考古学以及生物学等多方面进行探讨，但仍然存在很多争议。

随着科技的不断进步，分子遗传学分析为犬的遗传变异及种群遗传学研究等提供了新的手段，从基因水平上反映犬种的遗传信息可以明确犬种的遗传变异水平以及种群分析。……