蔡 耘， 张绪超， 陈惠芹， 吴北燕， 黄绍良

(1中山大学附属第三医院儿科，广东广州510630;2中山大学附属第二医院干细胞研究中心，广东广州510120;3广东省人民医院医学研究中心，广东广州510080)

胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化特性，对其造血分化研究不仅是探索机体造血发生发育机制的重要手段［1］，亦有助于成体造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)的体外扩增和临床应用，由ESCs诱导分化的HSCs还可能成为临床移植新的供体来源［2］。在ESCs体外定向诱导为HSCs模型中，基质细胞微环境的选择是重要环节。我们的前期工作已分别制备人主动脉－性腺－中肾区(aorta－gonadmesonephros，AGM)基质细胞系［3］及胎肝(fetal liver，FL)基质细胞系［4］，并发现前者可促进小鼠ESCs定向分化为HSCs［5］。现进一步以上述两种基质细胞为饲养层，结合造血因子与ESCs分阶段共培养，观察HSCs分化效率与造血功能，并以小鼠移植模型检测其安全性及体内造血重建能力，为 ESCs源性HSCs的制备提供研究基础。

材料和方法

1 细胞株

小鼠E14胚胎干细胞系(建株自129/Ola雄鼠)由中山大学附属第二医院干细胞研究中心引进，人AGM区基质细胞株hAGM3和hAGM4取自孕28－35 d经米非司酮及米索前列醇药物流产的人胚AGM组织［3］，人FL基质细胞取自孕16－20周经米索前列醇药物引产的胎儿肝脏组织［4］。所取胚胎均经流/引产者知情同意，实验方案经医院伦理委员会批准。

2 动物

无特定病原体(SPF级)BALB/c雌鼠，7－8周龄，体质量16－18g;6－8周龄NOD－SCID小鼠，体质量18－20g，均由中山大学实验动物中心提供，许可证号为SCXK(粤)2004－0011。动物置于无菌层流室动物洁净饲养柜中，所有操作均在无菌层流环境中进行，对动物的处置符合中华人民共和国科学技术部2006年颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》。……